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目的以“气血—脑髓”相关的中医理论为基础,在课题组前期应用益气活血通络法对局灶性脑缺血/再灌注(MCAO/R)大鼠神经可塑性的研究基础之上,选用益气活血通络法及其代表方脑络欣通对局灶性脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型大鼠进行给药干预治疗,观察给药14d后MCAO/R大鼠学习记忆能力及动态观察给药后3d、7d、14d局灶性脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型大鼠缺血侧海马CA4区GluR1、Ca MKⅡ及海马PKA蛋白的变化。探讨益气活血通络法对局灶性脑缺血后学习记忆及海马突触可塑性的影响及其作用机制。方法选用雄性健康的SD大鼠160只,体重在300±20g范围内。将大鼠通过随机数值表法分为分为5个组,分别是假手术组(J组)、模型组(M组)、益气活血通络法组(YH组)、益气法组(Y组)、活血通络法组(H组),每组分别为32只,每组再分3d、7d、14d三个亚组。每组3d、7d的亚组均为9只,14d的亚组均为14只,在每组14d的亚组内依据随机数字表法各取出5只用于水迷宫实验。通过改良线栓法建造大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型,并依据Zea Longa评分标准对MCAO/R大鼠神经功能体征作出评分,选用2分、3分者。造模24h后,脑络欣通、益气方及活血通络方分别以8.54g/kg、3.5g/kg、5.04g/kg的剂量给予各组大鼠灌胃,每天两次。在灌胃14d后,Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力。在灌胃第3d、7d、14d后分别使用4%多聚甲醛心脏内灌注固定后,进行开颅取脑,或直接开颅取新鲜脑,剥离海马。Morris水迷宫检测各组大鼠定位航行、空间探索能力。免疫组化Envision二步法检测各组大鼠缺血侧海马CA4区GluR1、Ca MKII的表达。Western blot检测缺血侧海马PKA蛋白的表达。DB801型水迷宫视频分析系统对各组大鼠定位航行时间及空间探索数据进行采集。JD801图像分析系统对免疫组化检测所摄GluR1、Ca MKⅡ蛋白图片进行分析,并计算表达阳性面积。对Western blot曝光所得的条带使用Image J软件进行分析,并且计算蛋白相对表达量。使用IBM SPSS Statistics 23.0对数据进行统计处理,计量资料用Mean±S(`x±s)表示,各组之间使用单因素方差分析,且两两之间使用LSD相互比较,其中P<0.01具有差异显著性,P<0.05具有统计学差异。Graph Pad Prism 5软件制作统计图,word 2019软件制作统计表。结果Morris水迷宫显示:与J组相比,M组逃避潜伏期的时间显著延长(P<0.01),目标象限停留时间及穿越平台次数明显减少(P<0.01);YH组、Y组、H组与M组相比,逃避潜伏期的时间减少(P<0.05),目标象限停留时间及穿越平台次数增多(P<0.05);Y组、H组与YH组相比,逃避潜伏期的时间增多(P<0.05),目标象限停留时间及穿越平台次数降低(P<0.05);H组与Y组相比,逃避潜伏期及目标象限停留的时间、穿越平台的次数无显著差异(P>0.05)。免疫组化检测表明:(1)GluR1蛋白在MCAO大鼠右侧大脑缺血灶海马CA4区显现的是棕黄色,主要表达在神经细胞膜中。在海马CA4区部位中,GluR1蛋白在J组3d、7d、14d三个时间点阳性表达量较多,M组的GluR1蛋白与J组各时间点相比较阳性表达量降低且表达阳性面积差异具有显著性(P<0.01);各时间点YH组、Y组与H组GluR1蛋白与M组相比较阳性表达量增多,并且表达阳性面积差异具有显著性(P<0.01);与YH组相比较,在各时间点Y组、H组GluR1阳性表达量下降,并且表达阳性面积具有差异性(P<0.05);各时间点H组GluR1蛋白与Y组相比较表达阳性面积在统计学中无差异性(P>0.05)。(2)Ca MKⅡ蛋白表达在MCAO大鼠右侧大脑缺血灶海马CA4区显现的颜色为棕黄色,主要表达在神经细胞膜及胞浆中。在海马CA4区部位中,Ca MKⅡ蛋白在J组三个时间点中阳性表达量较多,各时间点M组Ca MKⅡ蛋白与J组相比较表达阳性面积减少且差异具有显著性(P<0.01);YH组、Y组与H组在各时间点中Ca MKⅡ蛋白与M组相比较表达阳性面积增加且差异具有显著性(P<0.01);与YH组相比较,各时间点Y组、H组Ca MKⅡ蛋白阳性表达量下降,并且表达阳性面积具有差异性(P<0.05);H组各时间点的Ca MKⅡ蛋白与Y组相比较表达阳性面积在统计学中无差异性(P>0.05)。免疫印迹法检测表明:J组PKA蛋白在MCAO大鼠右侧大脑缺血灶海马表达量较少,各时间点M组PKA蛋白与J组相比较表达量上升,其中3d、7d蛋白表达量差异具有显著性(P<0.01),14d蛋白表达量具有差异性(P<0.05);YH组、Y组与H组各时间点的PKA蛋白与M组相比较表达量增加,其中7d、14d蛋白表达具有显著差异性(P<0.01),3d蛋白表达具有统计学意义(P<0.05);Y组、H组在各时间点PKA蛋白与YH组相比较表达量降低,且具有显著差异性(P<0.01);H组各时间点PKA蛋白与Y组相比较,蛋白表达量在统计学中无差异性(P>0.05)。结论益气活血通络法及其代表方脑络欣通可能是通过上调缺血侧海马CA4区GluR1、Ca MKII,海马PKA蛋白表达水平,从而提高缺血侧海马区的突触可塑性,减轻脑组织损伤,进而促进学习记忆能力恢复。