金属硫蛋白(MT)是一种具有金属结合能力的低分子量蛋白质,具有抗氧化、抗衰老,重金属解毒等功能。家兔是常见的经济动物,其内脏营养丰富,占身体比重大,若不合理利用,会造成大量资源浪费。家兔的内脏尤其是肝脏中含有丰富的MT(2mg/g),探究其开发利用颇有意义。本试验旨在判断MT在各脏器的分布及MT制备工艺的研究。试验使用双水相系统(ATPS)纯化MT,解决了其他纯化工艺中使用有毒试剂,且价格昂贵的问题。试验中使用响应面法(RSM)进行提取与纯化条件的优化,从而得出MT的最佳制备工艺。主要研究结果如下:1、MT在家兔脏器中的分布依次为:肝脏>肾脏>空肠>盲肠>脾脏>心脏>肺>胃壁>血液>胆汁。2、肝脏MT提取工艺为:将待测组织与0.02 mol/L pH 7.8的Tris-HCl缓冲液以质量体积比1/6混合匀浆,4℃10000×g离心30 min,取上清液于80℃水浴加热11 min,6000×g离心取上清即为MT粗品。纯化工艺使用双水相系统,系统组成为PEG分子量8000,PEG浓度30%,硫酸铵浓度20%,pH 5,样品量1 mL。本试验提取得到的家兔肝脏MT为Zn-MT。通过双水相系统纯化得到的家兔肝脏MT含量为1.98 mg/g,纯度为53.86%。3、肾脏MT提取工艺为:将待测组织与0.02 mol/L pH 8.6的Tris-HCl缓冲液以质量体积比1/6混合匀浆,4℃10000×g离心30 min,取上清液于82℃水浴加热8 min,6000×g离心取上清即为MT粗品。纯化工艺使用双水相系统,系统组成为PEG分子量4000,PEG浓度50%,硫酸铵浓度30%,pH值5,样品量1.5 mL。本试验提取得到的家兔肾脏MT为Zn-MT。通过双水相系统纯化得到的家兔肾脏MT含量为3.99 mg/g,纯度高达90.07%。综上所述,家兔主要脏器中均存在一定量的MT,尤其是肝脏和肾脏的MT含量较高。利用双水相系统纯化家兔肝脏和肾脏的MT,效果明显。说明双水相萃取法适用于MT的提取。