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小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants,PPR)是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。PPRV与其他麻疹病毒属成员均对淋巴细胞和上皮细胞具有较强嗜性。PPRV因其淋巴细胞嗜性导致机体在感染后表现出持久的免疫抑制。现已证实,信号淋巴细胞活化分子(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM),也称作CD150,是麻疹病毒属MV、CDV、RPV、PPRV在淋巴细胞的受体,可以在活化的以及记忆性的T细胞、B细胞,单核细胞,NKT细胞以及成熟的DC细胞中表达。因此,关于SLAM受体表达调控机制研究对深入阐明PPRV对宿主动物,特别在山羊等易感动物的致病机制具有重要意义。近年来,越来越多的证据表明宿主细胞microRNA(miRNA)是宿主-病原体相互作用复杂网络中不可或缺的调节因子。本研究旨在探索PPRV体外感染山羊外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)后,细胞源miRNA调节SLAM受体的作用机制及其对PPRV复制的影响,获得的主要研究结果如下:1)通过深度测序检测PPRV N75-1疫苗株感染对山羊PBMCs中miRNA表达谱的影响发现:与对照组相比,PPRV感染PBMCs 24 h后能够诱导316种显著差异表达的miRNAs,其中包括103种已知miRNAs与213种未知的miRNAs。通过对差异表达miRNAs进行靶向基因预测及功能分析发现,它们主要对细胞TLR信号通路、PI3K-Akt信号通路、细胞内吞作用、病毒致癌作用以及JAK-STAT信号通路等有调控作用。2)PPRV感染山羊PBMCs引起细胞肿胀、聚集成团,随着感染时间延长,细胞病变程度渐进性增强。以不同MOI(0.1、1、10)PPRV感染PBMCs,通过qRT-PCR及Western blot检测miR-218及SLAM的表达水平发现,miR-218和SLAM表达水平分别呈现病毒感染剂量依赖性的降低和升高。此外,miR-218表达随PPRV感染时间的延长呈现先降低后升高的变化趋势,SLAM mRNA及蛋白表达水平随病毒感染时间延长呈先升高后降低的变化趋势,表明PPRV感染山羊PBMCs中miR-218和SLAM表达水平始终呈负相关。为进一步研究miR-218对PPRV感染山羊PBMCs中SLAM受体表达水平的调控作用,通过转染不同剂量浓度的miR-218 mimic,miR-218 inhibitor及其相应的Control序列发现,miR-218对PPRV感染PBMCs中SLAM受体表达水平的负调控作用具有剂量依赖性。此外,双荧光素酶报告基因实验表明miR-218可直接靶向SLAM基因的3’UTR。通过Western blot及ELISA检测转染并接毒处理后山羊PBMCs中不同细胞因子的蛋白表达及分泌水平,发现mi R-218通过调节SLAM通路介导的Th1型免疫反应影响PPRV的复制水平。3)通过使用紫外灭活PPRV(UV-PPRV)感染山羊PBMCs,qRT-PCR、Western blot及流式检测发现PPRV的复制能力是影响miR-218介导SLAM表达水平调节的重要因素。综上所述,本研究通过PPRV N75-1疫苗株感染山羊PBMCs,证实了细胞源miR-218对PPRV感染山羊PBMCs中SLAM受体表达的转录后水平调控作用及其对病毒复制的影响。