穿心莲内酯对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株增殖和抑制影响的实验研究

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研究的背景和目的:目前舌鳞状细胞癌在口腔癌中的发病率最高[1,2],不断寻找新的安全有效的抗肿瘤药物具有重要的意义,近年来中草药中的抗肿瘤药物成为了研究的热点[3,4]。穿心莲(Andrographis paniculate Ness)是一种爵科植物,现已有许多国家在研究使用[5-7]。研究发现穿心莲中的穿心莲内酯(Andrographolide,AD)不但有抗炎、抗菌、抗病毒作用,还有较强的抗肿瘤作用[8-12]。目前AD还未用于舌鳞癌的研究,做此研究有积极的现实意义。本研究目的在于检测AD对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、细胞周期和BaxmRNA、Bcl-2mRNA表达的影响,从凋亡基因Bax、Bcl-2mRNA的表达情况来探讨AD可能的作用机制,为AD可能成为临床上治疗舌鳞癌的新药物提供了一定依据。研究内容和方法:1.人舌鳞癌Tca8113细胞在常规条件下培养,取对数生长期的细胞用于实验。2.分别加入浓度为0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用于Tca8113细胞,分别继续培养24h和48h后,用MTT法检测AD对细胞生长增殖的抑制作用。3.分别加入浓度为0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113细胞,分别继续培养24h和48h后,用流式细胞仪分析AD对细胞周期的影响。4.分别加入浓度为0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113细胞,继续培养24h后,用RT-PCR法检测AD对人舌鳞癌Tca8113细胞Bax、Bcl-2mRNA表达的影响。结果:1.MTT结果显示,AD作用Tca8113细胞后,能够显著地抑制细胞的增殖;分别加入浓度为0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用Tca8113细胞24h后,细胞的抑制率分别为(0±0)%,(2.37±0.19)%,(11.34±1.01)%,(36.65±1.99)%,(49.61±3.34)%,(72.11±5.01)%;AD作用Tca8113细胞48h后,细胞的抑制率分别为(0±0)%,(11.37±1.01)%,(27.43±1.93)%,(46.08±3.28)%,(65.59±6.33)%,(79.47±7.33)%。Tca8113细胞在AD作用相同的时间里,随着实验剂量范围内AD浓度的增加,细胞的抑制率逐渐升高(P<0.05);而同一AD浓度组的细胞被AD作用48h的抑制率比作用24h的抑制率高(P<0.05),具有明显的剂量-时间依赖性。利用SPSS软件计算出舌鳞癌细胞被AD作用24h后的IC50值为74.66μg/ml。2.流式细胞术(FCM)结果显示,浓度分别为0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113细胞24h后,细胞周期中的G0/G1期细胞比例分别为(39.45±0.56)%,(49.10±0.81)%,(56.61±0.64)%,S期细胞比例分别为(56.55±0.53)%,(46.57±0.60)%,(36.86±0.73)%。不同浓度的AD作用Tca8113细胞48h后,细胞周期中的G0/G1期细胞比例分别为(40.16±1.03)%,(57.34±0.65)%,(63.70±0.65)%,S期细胞比例分别为(58.31±0.75)%,(37.23±0.76)%,(32.28±0.54)%。Tca8113细胞在AD作用相同的时间内,随着AD浓度的增加,G0/G1期细胞分布比例升高(P<0.01),S期的细胞降低(P<0.01);细胞在相同浓度AD的作用下,随着作用时间延长,G0/G1期的细胞分布比例升高(P<0.01),而S期的细胞分布比例降低(P≤0.01);对照组(0μg/ml)细胞在培养24h与48h后,舌鳞癌细胞周期的分布变化不大,(P>0.05)。3.RT-PCR检测结果显示,AD浓度分别为0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml作用于Tca8113细胞24h后,BaxmRNA的表达量分别为0.383±0.013,0.513±0.021,0.631±0.036,0.733±0.042,0.916±0.048;Bcl-2mRNA的表达量分别为1.137±0.016,0.913±0.025,0.570±0.030,0.403±0.032,0.333±0.025。AD能够促进细胞中BaxmRNA表达,抑制Bcl-2mRNA表达(P<0.05),并具有剂量依赖性。结论:穿心莲内酯(AD)对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用,能够显著的阻滞细胞周期于G0/G1期,并且能促进细胞株BaxmRNA表达和抑制Bcl-2mRNA表达,从而诱导细胞凋亡,为AD可能成为临床上治疗舌鳞癌的新药物提供了一定的实验依据。
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