论文部分内容阅读
目的：探讨Runx3基因对HepG2细胞耐药性的影响及可能机制。方法： HepG2顺铂耐药细胞（HepG2/CDDP-1.6），用Runx3-shRNA表达载体（pRunx3-shRNA）转染HepG2/CDDP-1.6细胞；取HepG2/CDDP-1.6细胞，在2.0ug/ml的CDDP中继续培养24、48、72h，建立耐药HepG2/CDDP的动态变化模型（HepG2/CDDP/2.0），予以5-氮-2，-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理。RT-PCR检测pRunx3-shRNA转染及5-Aza-CdR处理前后细胞Runx3mRNA的表达；用MTT法和流式细胞仪分别检测转染pRunx3-shRNA及5-Aza-CdR处理前后细胞的增值活性及细胞周期分布；荧光Hoechst33258染色检测经5-Aza-CdR处理前后细胞的凋亡状态；Western Blot检测转染pRunx3-shRNA及5-Aza-CdR处理前后P-gp表达的变化。结果：pRunx3-shRNA转染HepG2/CDDP-1.6细胞48h后，G1期细胞为57.2%，P-gp的表达为0.63±0.02，与未转染组和阴性对照组相比均增加（P＜0.05）。HepG2/CDDP/2.0动态变化模型中， Runx3mRNA的表达逐渐降低，24、48和72h分别为0.50±0.02、0.37±0.05和0.26±0.03（P＜0.05）。5-Aza-CdR处理后，Runx3mRNA的表达在24、48和72h分别为0.52±0.03、0.54±0.04和0.62±0.01，均高于处理前（P＜0.05）。同时，细胞生长受到明显抑制，凋亡细胞明显增多，S期细胞逐渐增加,分别为29.0%、34.1%、45.7%（P＜0.05），但P-gp的表达逐渐减少，分别为0.40±0.02、0.33±0.05和0.20±0.03（P＜0.05）。结论：通过对Runx3基因表达的初步调控，提示Runx3基因的表达可调节HepG2/CDDP耐药的形成，改变HepG2/CDDP细胞对化疗药物的敏感性。细胞周期的变化可能是Runx3参与HepG2/CDDP耐药形成的关键环节。