丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染所引起的丙型肝炎成全球分布。据WHO估计,目前全世界HCV的感染者已达到1.3亿,平均感染率约为2.2%,且呈增长趋势,特别是在静脉吸毒人群和血液透析人群中HCV的感染率远远高于一般人群,是重要的传染源。HCV感染可导致急性、慢性肝炎和肝纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC),对患者的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题。HCV感染是环境(病毒)和宿主因素相互作用的结果。HCV基因组呈高度的可变性和异源性,变异的主要目的在于逃避宿主的免疫监测,从而能在宿主体内持续存在,形成慢性化。HCV基因型的分布有明显的地区差异,我国大部分地区流行的HCV型别为1b型,其次为2a型,在南方城市1b型感染率占90%以上,从南向北2a型逐渐增多,HCV不同基因型、亚型与HCV感染者临床症状的严重程度、干扰素治疗的敏感性、疾病的转归以及HCV的感染途径、地区分布规律等具有高度的相关性。近年来随着分子生物学技术的进步,人们越来越注意到丙型肝炎的发生及预后不仅与微生物本身的致病力有关,还与不同感染者个体的遗传因素密切相关。因此,有关HCV遗传易感性的研究逐渐受到世人关注,但至今尚未澄清遗传因素在丙型肝炎的发生、发展中所起的作用。细胞因子白介素-18(interleukin-18,IL-18)拥有广泛的免疫调节特性,参与宿主的固有免疫和获得性免疫调节,在丙型肝炎的发病过程中起着重要的作用。本研究选取IL-18作为丙型肝炎易感性的候选基因,采用病例-对照研究设计方法,探讨江苏地区静脉吸毒人群HCV基因型的分布及IL-18基因多态性与HCV感染易感性的关系。HCV感染是常见的血源性传播疾病,目前全球大约有1.3亿人感染HCV,我国约3.2%的人感染HCV,感染后大部分感染者将发展为慢性肝炎、肝硬化,是危害人类健康的重要传染病之一。HCV是黄病毒科肝炎病毒属的成员,其基因组为单股正链RNA,易发生突变,变异位点可以发生在基因组的各个区域,根据变异位点的不同将HCV分为不同基因型和基因亚型,各型的的地区分布、疾病的转归、临床症状的严重程度及对干扰素治疗的敏感性有很大差异。因此研究HCV的分子流行病学特点对HCV感染的预防和控制具有重要意义,本研究采用型-特异性引物基因分型方法,对江苏地区吸毒人群中丙型肝炎患者体内HCV分型情况进行研究,为江苏地区丙型肝炎的临床诊断和疾病预防提供一定的实验依据。[目的]了解江苏地区静脉吸毒人群HCV常见基因型的分布特点,为丙型肝炎的诊断和预防提供实验依据。[方法]用荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescence Quantitive -polymerase chain reaction,FQ-PCR)法对552份抗-HCV抗体阳性吸毒人员血清进行HCV RNA检测,根据国际公认的Simmonds HCV基因命名系统,依据HCV核心区设计1a、1b、2a、2b、3a型特异性引物,用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和型-特异性引物法对259份HCV RNA阳性患者血清标本进行基因分型。[结果]1 HCV基因分型检测结果552份抗-HCV抗体阳性血清中,有259份为HCV RNA阳性,其中1b型187份(72.2%),2a型24份(9.3%),1a型1份(0.4%)、2b型1份(0.4%),混合型感染44份(17.0%),不能分型的2份(0.8%)。2 HCV基因型在不同性别人群中的分布男性和女性之间HCV基因型总体分布差异有统计学意义(P=0.017),并且1b型感染和非1b型感染的分布差异亦有统计学意义(P=0.034),单纯型和混合型感染的分布差异无统计学意义(P=0.954)。3 HCV基因型在不同年龄人群中的分布不同年龄组人群中HCV基因型总体分布、1b型和非1b型、单纯型和混合型的分布差异均无统计学意义(P=0.961,P=0.508,P=0.995)。4 HCV基因型在不同ALT水平人群中的分布根据谷氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase ,ALT)水平不同,将HCV RNA阳性者分为ALT正常组(ALT≤40U/L)和异常组(ALT>40U/L),分析显示两组人群HCV基因型总体分布差异有统计学意义(P=0.006),单纯型和混合型、1b型和非1b型的分布差异亦有统计学意义(P=0.014,P<0.001)。5 HCV基因型和HCV RNA载量的关系进一步分析HCV基因型与HCV RNA载量的关系显示:不同HCV基因型感染者之间HCV RNA含量差别有统计学意义(P<0.001)。[结论]江苏地区静脉吸毒人群HCV基因型以1b型为主,其次为混合感染型,其它多种基因型并存,总体分布特点介于中国南北方之间。丙型肝炎的发病是多种因素协同作用的结果。实验研究表明,宿主因素在丙型肝炎的发病过程中起着重要作用,宿主免疫因素尤其是细胞免疫异常可能在丙型肝炎发病中起着重要作用,丙型肝炎特征性病理改变(肝脏汇管区淋巴样细胞聚集或形成滤泡)也提示免疫发病机理参与丙型肝炎的发病。IL-18是一种能诱导干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)产生的新型细胞因子。人类IL-18基因位于第11号染色体上(11q22.2-q22.3),在机体的多种细胞都有表达。IL-18拥有广泛的免疫调节特性,通过IFN-γ与CD134途径参与机体的固有免疫和获得性免疫调节,参与宿主的免疫防御,在丙型肝炎发病过程中起着重要的作用。本课题重点研究IL-18基因多态性在江苏地区静脉吸毒人群中的分布特点及其与HCV感染易感性的关联性。[目的]探讨IL-18基因多态性在江苏地区静脉吸毒人群中的分布特点,及其与HCV感染易感性的关联性。[方法]采用病例-对照研究设计,收集江苏地区静脉吸毒人员1200人,其中①丙型肝炎病例组(抗-HCV抗体阳性)552例,按照HCV RNA检测结果将病例组分为自限清除组(HCV RNA阴性)和持续感染组(HCV RNA阳性);②对照组(抗-HCV抗体阴性)648例,两组之间根据地区、性别、年龄进行匹配。采用TaqMan-MGB探针方法对IL-18 SNPs位点进行多态性检测,初步探讨IL-18基因多态性与HCV感染易感性的关系。采用多元Logistic回归模型计算IL-18各不同基因型人群患丙型肝炎的风险(Odds Ratio,OR)及其95 %可信区间(Confidence Interval ,CI)。[结果]1一般情况比较病例组与对照组的平均年龄和性别构成差异无统计学意义(P=0.136,P=0.135);病例组的ALT和AST水平显著高于对照组(P<0.001)。对照组-656G>T,-137G>C,+105A>C位点基因型频率分布符合Hardy-Weinbery平衡(P>0.05),说明具有人群代表性。2各位点等位基因在病例组与对照组的分布等位基因频率分布显示:-656G>T位点的等位基因G和T分布频率在两组间基本一致(50.2%,49.8%;50.5%,49.5%);-137G>C位点的等位基因G和C分布频率在病例组分别为83.9%和16.1%,对照组分别为86.7%和13.3%,+105A>C位点的等位基因A和C分布频率在病例组分别为88.1%和11.9%,对照组分别为81.8%和18.2%,A和C等位基因频率在病例组和对照组的分布差异有统计学意义(P<0.001)。3各位点基因型与HCV感染易感性关系的logistic回归分析IL-18各多态性位点与HCV感染易感性的关系分析显示:+105A>C位点,经过调整年龄、性别和ALT后,与野生AA基因型相比,携带突变杂合子AC基因型以及突变纯合子CC基因型者能显著降低HCV感染的易感性,调整OR值及95%CI分别为0.67(0.51-0.87 )和0.21(0.08-0.55),感染HCV的风险分别降低了33%和79%。但-656G>T、-137G>C位点,未发现这两位点的基因多态性与HCV感染的易感性存在关联。4 +105A>C位点多态性与HCV感染风险关系的分层分析IL-18 +105A>C位点多态性与HCV感染易感性的分层分析显示:与AA基因型相比,在男性、中年组(30<Y≤60)以及ALT异常组(ALT>40U/L)中,携带突变杂合子AC基因型可使HCV的感染风险降低,男性携带AC基因型者感染HCV的风险降低了57%,调整OR值(95%CI)为0.43(0.27-0.68);中年组携带AC基因型者感染HCV的风险降低了31%,调整OR值(95%CI)为0.69(0.52-0.92);ALT异常组携带AC基因型者感染HCV的风险降低了62%,调整OR值(95%CI)为0.38(0.24-0.61)。与携带AA基因型相比,在女性、中年组以及ALT异常组中,携带突变纯合子CC基因型可使HCV的感染风险降低,女性携带CC基因型者感染HCV的风险降低了76%,调整OR值(95%CI)为0.24(0.08-0.72);中年组携带CC基因型者感染HCV的风险降低了75%,调整OR值(95%CI)为0.25(0.08-0.74);ALT异常组携带AC基因型者感染HCV的风险降低了84%,调整OR值(95%CI)为0.16(0.04-0.55)。5 IL-18各位点在自限清除组和持续感染组之间的分布IL-18各位点在自限清除组和持续感染组之间的分布显示:在调整年龄、性别和ALT后,IL-18基因+105A>C位点多态性在自限清除组和持续感染组之间分布差异有统计学意义,与野生AA基因型相比,携带突变杂合子AC基因型者能显著降低HCV的持续感染,调整OR值及95%CI分别为0.61(0.40-0.92),HCV的持续感染风险降低了39%。-656G>T、-137G>C两位点各基因型在自限清除组和持续感染组的分布差异无统计学意义。[结论]IL-18基因多态性可能与丙型肝炎易感性及慢性化有关。