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本课题先以1、14、28、42、56日龄的仔猪为试验对象，以RT-PCR法为检测手段，研究不同日龄仔猪抗菌肽PR-39基因表达的变化规律。根据已报道的猪抗菌肽PR-39和看家基因β-肌动蛋白（β-actin）基因序列，分别设计PR-39和β-actin的引物，探讨了PCR体系中适宜的MgCl2浓度、循环次数以及两对引物间竞争情况。试验揭示MgCl2适宜的浓度为2.5 mmol／L，循环次数为29。根据两对引物之间的杂交配对，分别进行了扩增。构建了优化的RT-PCR法，用于仔猪抗菌肽PR-39基因mRNA表达量的测定。 试验结果发现，仔猪断奶后PR-39 mRNA表达量有较大的变化。仔猪刚出生时PR-39相对于β-actin的mRNA表达量平均为0.45，14日龄时上升为0.74，28日龄时上升为0.88，42日龄时（断奶后7天）下降为0.22，56日龄时上升到2.30。 挑选96头36日龄杜长嘉断奶仔猪，分成处理1（对照组）、处理2、处理3、处理4四个组（每个组设3个重复，每个重复8头猪，公母各半）。基础日粮相同（消化能13.25 MJ／Kg，粗蛋白18.5％）， 处理1日粮中不添加任何锌源，处理2、3、4分别饲喂以硫酸锌、氧化锌和纳米氧化锌的形式添加100 mg／kg、3000 mg／kg、100 mg／kg锌的饲粮。预试期为7天，饲养正试期为15天。试验猪充分喂料（日喂四次），自由饮水。15天后按体重相近的要求，从每组各选3头，共12头，屠宰，取左腿股骨骨髓，从骨髓组织中提取总RNA，反转录成cDNA保存。采用已构建的优化RT-PCR法，适当调整循环数的参数，检测各处理组样品中PR-39相对于β-actin的mRNA表达量。 饲养试验结果表明：与对照组相比，处理3（添加3000 mg／kg Zn的ZnO组）日增重提高了36.45％（P=0.01）；处理2（添加100 mg／kg Zn的ZnSO4组）和处理4（添加100 mg／kg Zn的纳米ZnO组）分别提高了10.62％（P=0.06）和21.42％（P=0.05）。处理3料重比比对照组降低了25.74％（P＜0.01），统计结2003年浙江大学硕士学位论文果差异极显著，处理2和4分别降低了18.57%（P<0 .05）和22.79%（P<0 .05）。 mRNA定量结果显示:抗菌肤PR一39 mRNA表达量与对照组相比，处理3提高了378.26%（P<0.01），效果极显著;处理2、处理4分别提高了38.4%和23.91%，但统计结果差异不显著。 上述结果提示:（l）断奶前仔猪抗菌肤PR一39 mRNA表达量呈逐渐增加趋势，断奶后其表达量比断奶前显著下降，表明断奶对仔猪PR一39 mRNA表达有较大影响，断奶后仔猪免疫力下降，腹泻率、死亡率高可能与抗菌肚表达下降有关。（2）在仔猪日粮中，以不同锌源（ZnSO4、ZnO、纳米ZnO）补充锌均能提高PR一39 mRNA的表达量，其中高剂量Zno组（3000m叭9 zn）显著提高了仔猪PR一39 mRNA表达。提示锌可能直接参与了抗菌肤PR-39基因表达的调控，且高剂量ZnO组（3000m叭9 Zn）所具有明显抗腹泻效果可能与其极显著提高断奶仔猪抗菌肤PR-39基因表达有关。