目的:用柱层析法从广西眼镜蛇毒中分离纯化出蛋白Natri;探讨Natrin对抗人肿瘤细胞的生物洁性研究。
　　方法:(1)广西眼镜蛇粗毒经SephadexG75凝胶过滤及CMSepharoseCL-6B阳离子交换柱及FPLCmono-S柱层析进行分离纯化得到Natrin蛋白:再用SDS-PAGE鉴定Natrin的纯度和相对分子质量。(2)采用MTT法，以Natrin浓度分别为0.625,1.25,12.5,125,250μgIml处理人肝癌BEL-7721细胞株、HEPG2细胞株、人卵巢癌SKOV3细胞株和人宫颈癌SIHA细胞株等四种人肿瘤细胞作用24h，观察不同浓度Natrin对四种人肿瘤细胞的毒性和生长抑制率;(3)以不同浓度处理人卵巢癌SKOV3细胞株24小时后，固定脱干包埋切片染色后利用电子显微镜的方法观察人卵巢癌SKOV3细胞株的形态变化;(4)以不同浓度处理人卵巢癌SKOV3细胞株24小时后，用AO/EB试剂染色利用倒置荧光显微镜的方法观察人卵巢癌SKOV3细胞株的染色及形态变化;(5)以不同浓度处理人卵巢癌SKOV3细胞株24小时后，采用AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测人卵巢癌SKOV3细胞株的凋亡率。
　　结果:(1)从广西眼镜蛇毒中分离纯化出Natrin，经测定其相对分子质量为25Ku，质谱测定分子量为24.937Ku，测得N端的序列为NVDFNSESTRRKKKQKEIVD;(2)Natrin对四种人肿瘤细胞均有细胞毒性作用，且呈剂量依赖关系，尤其是对SKOV3的抑制作用更强，对SKOV3作用24h的IC50值为1.47μg/ml;电镜观察可观察到人卵巢癌SKOV3细胞株的凋亡细胞的主要特点为:核染色质固缩、边集，核膜皱裙，胞质紧实，电子密度增加，及调亡小体现象:倒置荧光显微镜下可观察到人卵巢癌SKOV3的凋亡细胞的主要特点为:细胞体积缩小，染色质固缩，桶红色荧光增强:流式细胞仪检测到人卵巢癌SKOV3细胞株的凋亡细胞的的早期凋亡率在一定剂量内随Natrin浓度的增高而增加，但是到达最大值后凋亡率反而随着Natrin的浓度的增加而有所降低，各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较仍有明显差异(P＜0.05)。