miRNAs在动物生长发育、细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡等生命活动中具有广泛的调节作用，miRNAs近年已成为生命科学研究中的亮点。随着miRNAs的发现及其功能研究的深入，乳腺生长发育和泌乳表达调控的研究也进入了miRNA调控的新层面。miR-142-3p在多种细胞中有不同的功能，我实验室应用微阵列分析证实miR-142-3p在小鼠乳腺不同发育时期存在表达差异，但miR-142-3p如何调节小鼠乳腺发育和泌乳还不了解。催乳素（PRL）是广泛存在于高等动物体内的一类重要激素，对调控动物乳腺发育和泌乳有重要作用。PRL发挥作用是通过与特定高度亲和性受体相结合而引发。PRL通过与靶细胞膜表面的催乳素受体（PRLR）相结合，由催乳素受体介导，启动JAK2/STAT5信号转导途径，最终激活反式作用因子STAT5将信号转入细胞内，进而作用于乳蛋白基因启动子区的靶序列，启动或增强以乳蛋白基因启动子为顺式作用元件的靶基因表达。在乳腺发育、泌乳和退化过程中，需要多种激素和细胞因子协同作用， PRLR在小鼠乳腺泌乳过程中的表达关系到小鼠乳腺泌乳以及乳品质。Akt是丝/苏氨酸蛋白激酶超家族的成员，对细胞存活、增殖、代谢和凋亡中起作用。在Akt/mTOR信号通道中，Akt处于Akt/mTOR信号转导通路的核心地位。作为Akt下游的重要底物之一，TOR作为生长因子和营养信号的整合器，其上游刺激因子通过不同的细胞表面受体或靶蛋白，将信号转导至mTOR或直接作用于其下游效应器，进而调节细胞的生长和增殖。mTOR通路在乳腺上皮细胞代谢及生长方面发挥重要作用，研究结果提示，营养素和激素可通过mTOR途径调节乳蛋白合成。固醇调节元件结合蛋白(SREBP)属于核转录因子家族，是脂肪合成基因重要的转录调节因子，SREBP高表达可导致脂肪合成相关酶基因的高表达。研究发现，SREBP可能是乳腺脂肪酸合成的主要调节因子。乳腺中乳中脂肪酸链的形成，去饱和、脂肪酸链的延伸，以及脂肪合成过程一系列酶活性变化的上调可能与SREBP-1活性的升高有关。此外，SREBP-1在乳腺发育和泌乳过程中具有多重调节作用。GLUT1为构成小鼠、大鼠和牛的乳腺上皮细胞葡萄糖转运系统，定位于大多数细胞的质膜上，负责基础水平的葡萄糖吸收，它与能量代谢有密切关系。本研究以小鼠乳腺上皮细胞系作为研究的细胞模型，通过脂质体转染法向细胞中转染miR-142-3pmimics/inhibitor，应用实时荧光定量PCR技术检测Prlr及其相关通路基因的变化，采用Western blotting技术检测miR-142-3p对PRLR等泌乳信号分子蛋白的影响。使用CASY细胞活力分析仪检测活细胞数和细胞活力的变化。同时，应用HPLC检测酪蛋白和乳糖分泌的变化，采用TG试剂盒检测细胞甘油三酯的分泌情况。实验结果表明：①实时荧光定量PCR检测结果与芯片结果一致，miR-142-3p在小鼠乳腺的各个时期均有表达，与妊娠期、泌乳期和退化期小鼠乳腺相比，miR-142-3p在小鼠乳腺青春期的表达量最高，有显著差异（P<0.05）。在泌乳期，miR-142-3p表达量最低（P<0.05），推测miR-142-3p能够调控小鼠乳腺的发育及泌乳的周期性变化。②根据miR-142-3p对小鼠乳腺上皮细胞活力的CASY法测定及乳腺上皮细胞β-酪蛋白分泌水平的HPLC检测结果和甘油三酯的TG试剂盒检测，结果确定miR-142-3p抑制细胞的活力及增殖能力，进而抑制小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白和甘油三酯的生物合成，乳腺上皮细胞乳糖分泌水平的HPLC检测结果显示，miR-142-3p对小鼠乳腺上皮细胞乳糖分泌无显著影响。③荧光定量PCR和Western Blotting技术检测结果显示，miR-142-3p抑制内源性PRLR基因和蛋白的表达，影响PRLR相关泌乳信号分子的表达。过表达miR-142-3p时，细胞内SREBP、AKT1、mTOR、STAT5表达量均下降，抑制内源性miR-142-3p表达时，细胞内泌乳信号分子SREBP、AKT1、mTOR、STAT5表达均升高。推测miR-142-3p通过调控PRLR的表达，进而调控上述与乳蛋白和乳脂调控密切相关的泌乳信号分子。④本研究检测了过表达和抑制时，乳腺上皮细胞中GLUT1的表达情况，发现无论是过表达还是抑制，GLUT1的表达都升高，说明miR-142-3p对GLUT1的表达影响不大。