急性早幼粒细胞白血病是人体细胞第15号染色体PML基因与第17号染色体维甲酸基因相互易位形成的,易位导致PML/RARα融合蛋白的产生,该融合蛋白是急性早幼粒细胞白血病的特异性分子标志,因此检测PML/RARα融合蛋白成为诊断、分型、治疗急性早幼粒细胞白血病的最重要手段。目前检测PML/RARα融合蛋白常用核型分析、荧光原位杂交或者PCR技术,这些检测方法既耗时又存在很多不足。本研究发展了一种利用流式细胞仪免疫悬浮微球检测PML/RARα融合蛋白的新方法,该法可通过流式细胞仪检测PE荧光强度来定量分析PML/RARα融合蛋白。利用分散聚合法,通过添加不同质量的反应试剂,能得到粒径大小在3.5-7.0μm之间的单分散性良好聚苯乙烯微球。本研究表明:稳定剂PVP 6 g,无水乙醇80 g,引发剂AIBN1 g,交联剂DVB0.3 g,苯乙烯St单体21 g,含有羧基的烯烃化合物单体0.36 g时,聚合反应12小时,能得到粒径大小为5.4μm,变异系数小于10%的聚苯乙烯微球。在微球包被捕获抗体实验中,本文研究了EDC用量、缓冲液pH、偶联反应时间以及抗体偶联浓度这几个关键因素对偶联效率的影响,得出结论:当EDC用量为1 mg/20000个微球、pH为8.0、偶联反应时间为2 h、抗体量为1.0μg/20000个微球时,偶联效率最高。微球包被上捕获抗体之后,加入融合蛋白、检测抗体和PE标记的荧光二抗,微球上的抗PML捕获抗体捕获融合蛋白中的PML部分,检测抗体识别融合蛋白中RARα部分,这些微球通过流式细胞仪时能检测到PE荧光信号,然后通过PE荧光强度的大小就能定量分析PML/RARα融合蛋白。在免疫分析过程中论文比较了一步加入法和分步加入法,研究表明:分步加入法得到的灵敏度要高于一步加入法,而且降低本底的影响;研究还得出:在分步加入法中,最佳蛋白添加量为50μL,最佳检测抗体量为1.25μL,检测抗体的最佳体积为1.25μL,最佳孵育时间为1 h。本文结论:PML/RARα免疫微球分析可以用于检测白血病NB4细胞中的PML/RARα融合蛋白,该法较传统检测方法更快速,同时具有更高的灵敏度,具有应用于APL白血病实验诊断的潜能。