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目的:检测甲基化抑制剂处理前后宫颈癌Hela细胞增殖、BLU、HPVE6mRNA表达的变化,初步研究BLU基因在宫颈癌细胞中的甲基化状况及其去甲基化在宫颈癌发病中的作用。方法:用不同浓度5-Aza-CdR干预Hela细胞株3d后,采用RT-PCR检测BLUmRNA、HPVE6表达的变化;四唑氮蓝(M T T)比色法检测Hela细胞增殖变化情况。结果:(1)凝胶图像分析仪分析RT-PCR产物:实验组5-Aza-CdR(终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用Hela细胞3d前后,各实验组和对照组BLUmRNA/β-actin分别为0.170±0.023、0.404±0.016、0.599±0.015、0.038±0.004,随着5-Aza-CdR浓度的升高,其表达随之增加,经方差分析对照组和实验组之间差异具有显著性(F=701.430,P＜0.05)。实验组和对照组HPV18E6mRNA/β-actin分别为0.381±0.018、0.382±0.016、0.392±0.025、0.378±0.026,各实验组和对照组数据之间差异无显著性(F=0.221,P＞0.05),即5-Aza-CdR干预前后,HPV18E6mRNA表达无明显改变。(2)经终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的5-Aza-CdR处理HeLa细胞3d后,MTT检测各实验组细胞活力(A490值)分别为0.490±0.022、0.403±0.017、0.294±0.017,与对照组细胞活力(0.592±0.021)比较有明显差异(F=2659.17,P＜0.05)。在所检测的浓度范围内随着5-Aza-CdR浓度的增加,对HeLa细胞的增殖抑制随之增强,呈量一效关系(相关度比较R=—0.976,P＜0.05)。(3)5-Aza-CdR处理前后Hela细胞形态学出现以下改变:倒置显微镜下观察,对照组细胞生长状态良好,细胞伸展、透亮,呈不规则对角形,随时间推移,细胞渐增多,细胞接触紧密;实验组20μmol/L的5-Aza-CdR作用3d后,细胞间间隙增大,细胞数目减少不明显,胞浆、胞膜完整,细胞体积无明显改变。结论:1)5-Aza-CdR处理对Hela细胞株BLU基因的表达有明显的上调作用,提示DNA甲基化可能是BLU基因表达异常的主要机制之一。2)去甲基化使BLU基因表达上调对Hela细胞中HPV无影响。3)BLU基因甲基化可能与宫颈癌的发生、发展有关。