论文部分内容阅读
小肠移植是解决短肠综合征及各种小肠终末期衰竭的有效治疗方法,但其生理、病理及免疫学的特殊性,使其治疗效果较其他实体器官明显较差。而移植过程中所伴随的小肠缺血再灌损伤(Ischemia-reperfusioninjury,I/R)可引起肠内一系列的病变,近年研究发现,使用中药可以缓解和治疗肠I/R损伤。本实验将探讨三七皂R1(Notoginsenoside R1,NGR1)对小肠I/R的保护及其NGF信号通路中的神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)、酪氨酸激酶 A(Tropomyosin receptor kinase A,TrkA)以及神经生长因子前体(pro-Nerve growth factor,proNGF)、Sortilin、p75NTR(p75neurotrophinreceptor)在基因和蛋白水平上的表达变化。方法:110只SD大鼠体重250～300g随机分为正常组(n=10),小肠缺血再灌注组(n=20),注射等量生理盐水+缺血再灌注组(n=20),三七皂苷R1+缺血再灌注治疗组(n=60),共四组。采用夹闭小肠肠系膜上动脉的方法来制备小肠I/R模型,三七皂苷R1治疗组在小肠缺血再灌注后即刻静脉注射三七皂苷R1,生理盐水组小肠缺血再灌注后即刻腹腔注射等量生理盐水,模型组小肠缺血再灌注未注射生理盐水,正常组不进行任何操作。分别在缺血30min后再灌注,于再灌注24h、48h后处死动物。运用HE染色观察小肠组织形态,并采用Image-pro plus软件测量小肠绒毛高度,Tunel凋亡检测法检测小肠细胞凋亡情况。运用Real-Time PCR和Western blot方法分别在基因和蛋白表达水平分析三七皂苷R1对缺血再灌注小肠中NGF生长信号:NGF、TrkA,proNGF凋亡信号:Sortilin、p75NTR表达变化。结果:(1)对小肠形态进行观察发现,小肠的粘膜和绒毛结构受到破坏。与正常组相比,生理盐水+缺血再灌注组(NS+I/R组)、缺血再灌注组(I/R组)、三七皂苷R1治疗组(NGR1组)的小肠绒毛高度均升高(P<0.05),三七皂苷R1治疗组(NGR1组)的小肠绒毛高度较生理盐水+缺血再灌注组(NS+I/R组)、缺血再灌注组(I/R组)的绒毛高度趋近于正常水平,绒毛结构的损伤减轻(P<0.05)。(2)小肠再灌注48h比再灌注24h细胞凋亡数量多,注射三七皂苷R1后细胞凋亡数量减少(P<0.05),在再灌注48h注射NGR1 10mg/kg高剂量组的细胞凋亡数量减少较明显(P<0.05)。(3)小肠组织的NGF和TrkA的mRNA和蛋白表达水平与正常组比较整体水平呈下降趋势(P<0.05),在注射三七皂苷R1后NGF和TrkA表达上调(P<0.05),且缺血再灌注48h注射NGR1 10mg/kg高剂量组的NGF和TrkA表达明显上调(P<0.05)。Sortilin和p75NTR mRNA和蛋白表达水平与正常组比较整体水平呈上升趋势(P<0.05),在注射三七皂苷R1后NGF和TrkA表达下调(P<0.05),且缺血再灌注48h注射NGR1 10mg/kg高剂量组的NGF和TrkA表达明显下调(P<0.05)。结论:三七皂苷R1对SD大鼠小肠缺血再灌注具有保护作用,并且在注射不同剂量的三七皂苷R1后,注射剂量为10mg/kg时,小肠的受损程度明显减轻。三七皂苷R1通过调控NGF生长信号通路和proNGF凋亡信号通路来发挥保护小肠缺血再灌损伤损伤的作用。