【摘 要】
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目的:探讨内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress/ERS)参与房颤发生的机制。方法:1.大鼠心房颤动模型的建立:10只8周龄雄性SD大鼠经食道快速心房起搏后,观察房颤诱发的情况,并记录房颤诱发前后心电图的改变,制备房颤组模型(A F),对照组(control group)除不行经食道快速心房起搏,其余同AF组。2.大鼠及乳鼠内质网应激模型建立:用衣霉素刺激大鼠(成年)
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目的:探讨内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress/ERS)参与房颤发生的机制。方法:1.大鼠心房颤动模型的建立:10只8周龄雄性SD大鼠经食道快速心房起搏后,观察房颤诱发的情况,并记录房颤诱发前后心电图的改变,制备房颤组模型(A F),对照组(control group)除不行经食道快速心房起搏,其余同AF组。2.大鼠及乳鼠内质网应激模型建立:用衣霉素刺激大鼠(成年)心肌细胞,建立内质网应激模型(衣霉素组1),用衣霉素刺激乳鼠心肌细胞,建立细胞内质网应激模型(衣霉素组2),在此基础上转染miR-105 mimic建立衣霉素+miR-105mi mic组,磷酸盐缓冲液(PBS)处理成鼠心肌细胞建立对照组1,磷酸盐缓冲液(P BS)处理乳鼠心肌细胞建立对照组2,对照组2加入miR-105mimic建立对照组+mi R-105mimic组。3.GRP78、RyR2及miR-105检测:蛋白免疫印迹法检测葡萄糖调节蛋白GR P78、RyR2磷酸化表达水平,Real-time PCR检测心房颤动后内质网应激中的mi R-105。结果:1.10只SD大鼠经食道快速心房起搏,8天后房颤模型制备成功6只,n=6,成功率60%。2.与对照组相比,AF大鼠心脏组织中内质网应激活化,GRP 78表达水平增加(均P<0.05),RyR2磷酸化表达水平上调(P<0.05),miR-105表达下调(P<0.05)。3.与对照组1相比,大鼠(成鼠)心房肌细胞用衣霉素刺激后心房肌细胞内质网应激活化(GRP78表达上调)后,miR-105均表达下调(P<0.05),RyR2mR NA及蛋白水平表达上调(P<0.05),磷酸化增加(P<0.05)。4.与对照组2相比,衣霉素刺激新生大鼠心肌细胞内质网应激活化,GRP 78蛋白表达水平增加(P<0.05),miR-105均表达下调(P<0.05),在此基础上转染miR-105 mimic后,RyR2mRNA及蛋白水平较前表达下调(P<0.05),磷酸化水平较前下调(P<0.05)。结论:1.大鼠房颤模型中,内质网应激激活,RyR2表达增加,磷酸化表达水平增加。2.内质网应激模型中,RyR2总量及其磷酸化表达水平增加,miR-105表达降低,存在负相关。3.miR-105对内质网应激无影响。4.心房颤动时内质网应激激活,内质网应激通过miR-105-RYR2信号途径参与心房颤动的发生。
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