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ALDH1A1为乙醛脱氢酶(ALDH)基因超家族成员之一,是参与视黄醛代谢、促进维甲酸代谢通路的活化和调控脂肪酸代谢通路的关键基因之一。本试验将ALDH1A1基因构建到PMD18-T载体上,克隆延黄牛ALDH1A1基因cDNA序列,利用生物信息学软件分析该基因理化性质及其蛋白结构,并通过qRT-PCR技术检测ALDH1A1基因在延黄牛各个组织间的表达差异。结果显示:延黄牛ALDH1A1基因共编码501个氨基酸,理论等电点为7.16,属于碱性氨基酸,在细胞质中发挥主要作用;不是分泌性蛋白,属于亲水性蛋白,存在31个氨基酸磷酸化位点;蛋白质二级和三级结构预测结果显示4种结构,分别是α螺旋、β折叠、β转角和无规则卷曲。ALDH1A1基因在肝、胃、皮下脂肪、十二指肠和肾组织中表达极显著(P<0.01),在背最长肌中显著表达(P<0.05)。利用分子克隆技术成功构建了延黄牛ALDH1A1基因的siRNA干扰和过表达载体,再由脂质体2000介导转染到体外分离的延黄牛前体脂肪细胞中,利用qRT-PCR和蛋白质免疫印记检测ALDH 1A1基因mRN A和蛋白水平的表达情况。结果显示:ALDH1A1、LPL和成脂关键基因(C/EBPα和PPARγ),在诱导延黄牛前体脂肪细胞分化时呈现先升高后降低的趋势。ALDH1A1基因干扰组在诱导前体脂肪细胞分化的第0、4和9天中,呈现出先下降后升高的趋势;而过表达组在诱导前体脂肪细胞分化的第0、4和9天中,呈现出先升高后下降的趋势;ALDH1A1基因的过表达能显著促进成熟脂肪细胞脂滴和甘油三酯的生成,同时还显著促进LPL和成脂关键因子C/EBPα和PPARγ的表达,而ALDH1A1基因的干扰则与其相反,显著降低脂肪细胞脂滴及甘油三酯含量的生成,且显著抑制LPL和成脂关键因子C/EBPα和PPARγ的表达。研究表明ALDH1A1基因参与前体脂肪细胞分化的过程。为了进一步探索ALDH1A1基因的功能,本研究以99头18月龄的延黄牛母牛为试验对象,通过测序的方法筛查ALDH1A1基因的多态位点,再分析其与延黄牛肉用性状的关联性。结果显示:延黄牛ALDH1A1基因13个外显子中只有外显子4和11中检测到突变位点。外显子4在Chr9.49381142处存在T/G的突变且引起编码氨雄酸络氨酸的改变。外显子11在Chr9.49361243处存在T/A的突变,未引起编码氨基酸发生改变。内含子4在Chr9.49381356处存在G/T的突变。关联分析结果显示:ALDH1A1基因外显子4 TT基因型与延黄牛肉用性状中的十字部高、胸围、腹围、管围和背膘厚存在显著相关(P<0.05),与肌内脂肪具有一定的相关性(P<0.056);ALDH1A1基因外显子11 AA基因型与延黄牛肉用性状中的十字部高、官围、体重和背膘厚存在显著相关(P<0.05)。综上所述,本研究成功克隆获得延黄牛ALDH1A1基因编码区序列,并研究该基因在延黄牛各组织间的表达差异以及对脂代谢的影响和遗传多态性分析,为开展延黄牛ALDH1A1基因的功能及肉质基因筛选的工作提供理论基础和科学依据。