论文部分内容阅读
1研究背景阿尔茨海默病(Alzheimer’ sdisease,简称AD),又称老年痴呆症,是老年老化程度超过生理性老化,或过早老化,致使脑功能障碍,引起获得性、持续性智能障碍的进行性发展的神经系统退行性疾病,具有起病隐袭,致残率高等特点。临床常见记忆和认知功能障碍,伴有言语、理解、运动、情感等多种功能改变,病程3—15年,是老年期痴呆的主要病种。自1906年“德国精神病学会”年会中,德国医生Alois Alzheimer报告第一个病例至今,AD研究已有100余年,但其病因仍然未知,发病机制也未明确,更没有好的治疗手段,目前主要通过一些胆碱酯酶抑制延缓病情发展。随着近些年生活条件和卫生医疗条件的提升,全球老龄化加剧,由于历史和国情原因我国尤为突出,美国学者研究数据显示：AD在65-74岁人群中的发病率为1.6%,而大于85岁人群中的发病率可达到42%以上,由此可见,AD发病率随年龄增长而升高,这就加大了AD的患病率。世界卫生组织预计2015年老年痴呆患者将占全球人口的0.441%,到2030年运一数字将上升到0.556%。老年人群中AD已成为仅次于心脏病、恶性肿瘤和中风的第四死亡原因。因此AD的研究工作迫在眉睫,也是我们医学工作者为社会服务的使命之一。2研究目的本研究以AD模型SAMP8小鼠作为研究对象,脉冲电针仪和音乐电针仪作为干预手段,结合导师李志刚教授长期临床经验和前期实验工作基础,提出“通督启神法”治疗阿尔茨海默病的实验研究。本研究以“通督启神法”为治疗指导大法,AD模型小鼠海马CA3区Aβ蛋白为切入点,通过行为学、分子生物学等方法,探讨不同电针对△β蛋白清除途径的影响,并且比较两种电针疗效差异,以期为音乐电针治疗△D的临床推厂工作提供实验依据。3研究方法分组：将36只SAMP8小鼠,按随机数字表法随机分为3组：模型对照组(Model Control Group,C)脉冲电针组(Pulse Electric-acupuncture Group,PE)音乐电针组(Music Electric-acupuncture Group,ME),每组12只。SAMR1小鼠12只为空白对照组(Blank Control Group,B)。干预：MA组小鼠放入自制鼠袋并暴露头部,针刺“百会”和“印堂”后,针柄端通过导线与音乐电针仪相连通,选用治疗脑病的音乐处方,调节电流强度至针柄微微颤动,小鼠不挣扎保持安静为度,每次治疗20min,起针后点刺人中穴,每日1次,疗程为15天；EA组接入脉冲电针仪,其他同MA组；C组、M组用相同方法抓取束缚20min,每日1次,持续15天。检测：以Morris水迷宫实验检测小鼠行为学能力；免疫组织化学法检测海马CA3区Aβ1-42、ECE1、NEP的表达；WesternBlot法检测海马ECE1的表达情况,比较不同电针对Aβ清除机制的影响及二者之间的差异。4研究结果4.1Morris水迷宫试验结果定位航行实验结果：1)各组小鼠不同时间点组间比较结果显示：与C组比较,从第1天到第5天M组逃避潜伏期均增高,差异显著(P<0.05)。与Ⅵ组比较,EA组5天的逃避潜伏期均缩短,于第5天开始组间差异有统计学意义(P<0.05)；MA组5天的逃避潜伏期均缩短,于第5天开始组间差异显著(P<0.01)。与EA组比较,从第2天开始MA组逃避潜伏期低于EA组,但两者疗效差异无统计学意义(P>0.05)。2)各组小鼠不同时间点组内比较结果显示：与第1天比较,C组和MA组在训练第5天时逃避潜伏期明显降低,且差异极显著(P<0.01)；EA组在训练第5天时逃避潜伏期也明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)；M组训练过程中,逃避潜伏期变化无显著差异(P>0.05)。3)四组小鼠逃避潜伏期总体变化趋势均下降。C组前三天下降趋势平缓,第4天开始下降趋势逐渐明显；EA组和MA组第3天开始逃避潜代期即出现下坡式下降,第4天下降不明显,第5天再次出现下坡式下降；M组下降趋势平缓,在第3天出现平台期,其潜伏期趋势呈(下降期-平台期-下降期)。空间探索实验结果：与C组比较,M组小鼠穿越站台次数明显减少(P<0.01)；在目标象限游泳路程占总路程比例小,差异显著(P<0.01)；目标象限探索站台争用时间占总时间比例小,差异有统计学意义(P<0.05)。与M组比较,EA组小鼠穿越站台次数增多,差异有统计学意义(P<0.05)；MA组小鼠穿越站台次数也显著增多(P<0.01)；同时,两种方法干预后,EA组和MA组小鼠在目标象限游泳路程占总路程比例显著提高(P<0.01)；目标象限探索站台所用时间占总时间比例提高,差异有统计学意义(P<0.05)。与EA组比较,MA组疗效略优,但差异无统计学意义(P>0.05)。4.2免疫组化法检测结果小鼠海马CA3区A β1-42表达在细胞膜和胞浆中,阳性细胞呈棕褐色,与C组相比,M组A β1-42：表达水平明显升高(P<0.01)；与M组比较,EA组、MA组A β 1-42表达水平明显降低(P<0.05)；ME与EA组比较,疗效无显著差异(P>0.05)。小鼠海马CA3区ECE1和NEP表达在细胞膜和胞浆中,阳性细胞呈棕褐色,与C组相比,M组ECE1和NEP表达水平均明显降低(P<0.01)；与M组比较,EA组、MA组ECEl和NEP表达水平均明显升高(P<0.01)；ME与EA组比较,ECE1表达MA组高于EA组(P<0.05),而两组对NEP表达的影响无显著差异(P>0.05)。4.3 Western Blot法检测结果：小鼠海马CA3区ECE1表达,与C组比较,M组小鼠海马CA3区ECE1表达明显减少(P<0.01)；经脉冲电针干预后,EA组小鼠海马CA3区表达增多(P<0.05)；经音乐电针干预后,MA组小鼠海马CA3区表达明显增多(P<0.01)；EA组与MA组两组表达无明显差异(P>0.05)。5结论：(1)研究结果显示：本研究对象SAMP8小鼠存在明显的学习记忆障碍,同时海马CA3区Aβ蛋白表达量明显增多,是成功的AD模型。(2)脉冲电针和音乐电针干预AD模型小鼠,对其学习记忆能力均有改善,音乐电针疗效略优于脉冲电针。(3)脉冲电针和音乐电针干预AD模型小鼠,均能减少A β1-12在SAMP8小鼠海马CA3区的表达,从而发挥治疗痴呆的作用,但二者疗效无明显差异。(4)脉冲电针和音乐电针干预AD模型小鼠,均能增加ECEl和NEP两种A β降解酶在SAMP8小鼠海马CA3区的表达,促进A β的降解途径,从而达到治疗痴呆的目的。音乐电针增加ECEl的表达能力优于脉冲电针,而增加NEP表达方面二者差异不明显。(5)本研究证明,通督启神法对指导AD的治疗有积极意义。