目的：G蛋白偶联受体激酶（GRK）是一类能使G蛋白偶联受体（GPCR）快速脱敏（desensitization）的丝氨酸/苏氨酸激酶家族分子，其基本功能是特异性地磷酸化 GPCR，使其快速脱敏与 G蛋白解偶联，同时招募β–Arrestin并与之结合，从而阻断GPCR介导的信号转导通路。在哺乳动物中GRK家族共有7个成员，根据结构和功能的相似性分为3个亚家族，GRK4属于GRK4亚家族。在GRK家族中，GRK4的变异率最大，有多个剪接变异体，其组织表达呈高度选择特异性，参与多种疾病的致病机制，如原发性高血压、多巴胺受体介导的神经源性疾病、卵巢癌和乳腺癌等。目前，对于GRK4的了解知之甚少，而关于GRK4在组织器官的分布情况亦缺乏详尽的研究。因此，笔者选取大鼠作为实验动物模型来研究 GRK4基因的表达特征及功能，以期为之后的深入研究奠定良好的基础。　　方法：1.大鼠组织GRK4的表达特征：1）用Trizol提取不同年龄段大鼠卵巢组织和同只大鼠主要组织总RNA，逆转录合成cDNA，采用实时荧光定量PCR技术从RNA水平检测GRK4的表达特征；2）用加入抑蛋白酶肽、亮抑酶酞、PMSF的 RIPA蛋白裂解液提取组织总蛋白，采用 Western免疫印迹技术从蛋白水平检测 GRK4在不同年龄大鼠各组织中的表达情况。2. GRK4基因及其新剪接变异体的获取和克隆：根据GenBank里大鼠GRK4基因序列设计特异性全长扩增引物；根据Western blot检测结果，用Trizol提取大鼠睾丸和附睾组织总RNA，逆转录合成cDNA，二次PCR扩增出纯度较高的大鼠GRK4基因及其剪接变异体DNA，电泳鉴定；回收电泳琼脂糖凝胶中多个不同分子量的条带，TA克隆，蓝白斑筛选，随机选取阳性克隆经 PCR鉴定后，小提质粒送测序；使用 NCBI- BLAST工具（http://blast.ncbi.nlm. nih.gov/Blast.cgi）将所得序列与GenBank中己有序列进行比对分析，使用NCBI-Spidey工具(http://www.nebi.nlm.nih.gov/IEB/Research/Ostell/Spidey)在线分析有效序列各外显子组成及位置。　　结果：1.大鼠组织GRK4的表达特征：1）通过实时荧光定量PCR技术检测GRK4基因的表达情况，结果显示：①大鼠卵巢中GRK4基因的表达水平随卵巢发育成熟而变化；②GRK4基因主要表达于大鼠卵巢、肾脏、心和骨骼肌组织。2）通过Western blot检测GRK4蛋白的表达情况，结果显示 GRK4在大鼠的胸腺、睾丸、附睾、心和脑组织有较高表达，不同发育阶段其表达情况也不同。2.使用PCR技术扩增出大鼠GRK4基因及其新剪接变异体，TA克隆后送测序，经过比对分析获得2个在GRK4开放阅读框架内的新剪接变异体，命名为GRK4 variant X1和GRK4 variantX2。　　结论：（1）从时间特异性角度，通过对不同年龄段卵巢组织的研究发现 GRK4的表达水平随着卵巢组织的发育程度而变化，提示其与组织生长发育调控有关；从空间特异性角度，GRK4特异性地表达于大鼠睾丸、胸腺、心和脑组织中。（2）克隆获取大鼠睾丸、附睾组织中GRK4的DNA序列，与Genbank中已有序列比对分析后得到两个在GRK4开放阅读框内的新剪接变异体。这些发现为进一步深入研究 GRK4的功能提供了很有价值的信息。