【摘 要】
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目的:制备靶向H7N9神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的嵌合抗体,对其功能特性进行初步鉴定,为H7N9的预防控制提供理论依据。方法:根据鼠源抗N9 MAb原始信息,挑选8株特异性靶向流感病毒A/Anhui/1/2013(H7N9)NA的杂交瘤细胞株,使用基因工程技术对其进行人源化改造并获得嵌合抗体,通过ELISA,BLI,FACS,HI,NI,微量中和实验,ADCC,空斑实验及竞争E
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目的:制备靶向H7N9神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的嵌合抗体,对其功能特性进行初步鉴定,为H7N9的预防控制提供理论依据。方法:根据鼠源抗N9 MAb原始信息,挑选8株特异性靶向流感病毒A/Anhui/1/2013(H7N9)NA的杂交瘤细胞株,使用基因工程技术对其进行人源化改造并获得嵌合抗体,通过ELISA,BLI,FACS,HI,NI,微量中和实验,ADCC,空斑实验及竞争ELISA一系列实验技术对获得嵌合抗体活性及功能进行鉴定。结果:获得了三株特异性抗H7N9亚型流感病毒N9嵌合抗体1E2,3E3及5D1,对AH-N9蛋白的EC50值分别为0.048μg/ml,0.028μg/ml和0.675μg/ml;其中1E2和3E3对AH-N9蛋白具有极强的亲和力,KD值达p M;1E2和3E3具有相似的抗原结合部位并与5D1的抗原识别表位不同;三株嵌合抗体都能不同程度抑制NA酶活及耐药N9神经氨酸酶活,其中3E3 NA酶活抑制能力最强,体外细胞实验中只有1E2和3E3两株嵌合抗体可以抑制病毒释放,阻止病毒进一步感染细胞,其中3E3对病毒的抑制性最强。结论:本研究构建的三株嵌合抗体均能特异性识别A/Anhui/1/2013(H7N9)的N9蛋白,具有较强的NA酶活抑制,为防控和治疗H7N9禽流感以及抗体药物的制备建立了一定的理论基础。
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