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研究目的：探索泛素连接酶E3(Ubiquitin E3ligase) gp78在睾丸癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌等中的表达情况,以期建立gp78表达与上述肿瘤发生、发展的关系,并评价其作为潜在的肿瘤分子标志物的可能性,为肿瘤早期诊断、肿瘤分子分型及个体化医疗提供基础。最后,研究gp78参与肿瘤发生、发展的可能机制。研究方法：购买商业化的睾丸癌组织芯片、卵巢癌组织芯片、结肠癌组织芯片和前列腺癌组织芯片,根据其高通量,高密度,广泛代表性的特点,利用免疫组织化学染色方法对上述肿瘤组织中gp78的表达进行分析。利用芯片中的正常组织作为对照,分别统计芯片中正常组织和肿瘤组织中gp78的表达量和表达阳性率。进一步对芯片中肿瘤组织的病理资料如肿瘤分期、病例年龄、生存率等资料与gp78的表达率进行相关性分析,探索gp78表达的病理特征,建立gp78与肿瘤发生、发展的相关性,评价其作为潜在的肿瘤分子标志物的可能性。最后利用基因敲除技术,以结肠癌细胞系HCT116为模式对象,建立野生型细胞系-HCT116WT和gp78敲除细胞系-HCT116gp78KO,通过酶谱分析检测gp78敲除前后细胞表达基质金属蛋白酶(matrix matalloproteinase, MMPs) MMP-2和MMP-9的差异。进而探索gp78参与肿瘤迁移的可能机制。研究结果：1.免疫组织化学染色结果发现,gp78在人正常睾丸组织中和睾丸癌的组织中均有表达,其中正常组织中gp78的阳性率达到40%,而在所有肿瘤组织中gp78阳性率则为49%。2.卵巢癌中免疫组化染色发现,卵巢正常组织中叶存在gp78蛋白的表达,其阳性率为22%,而肿瘤组织的平均阳性率为39%。3.在结肠癌组织芯片中,所有正常结肠组织均未发现gp78的阳性染色信号,而结肠癌组织中gp78染色的阳性率为70%。4.前列腺癌芯片的免疫组化结果提供了最为明显的结果,在全部23个正常组织中均未检测到gp78蛋白的表达,在肿瘤组织中gp78的阳性率为50%。而且,在gp78阳性的组织中gp78蛋白的表达是非均一的,一部分组织表达于前列腺基细胞中,而另一部分组织表达于前列腺间质细胞中,二者比例接近。5.利用western blotting免疫印迹技术和免疫荧光染色检测试验所用的HCT116野生型细胞HCT116WT和gp78敲除细胞系-gp78KO,发现gp78KO细胞系中没有检测到gp78蛋白的表达,而HCT116WT细胞系中有正常的gp78的表达,说明我们利用的细胞系是gp78基因彻底敲除的,保证后续试验的可靠性。6.酶谱分析发现,在gp78被敲除之后,HCT116细胞中MMP-2和MMP-9的活性均有所降低,提示gp78可能通过调节MMP的活性促进肿瘤转移。研究结论：gp78的免疫组织化学染色结果显示, gp78在正常睾丸和卵巢组织及睾丸癌和卵巢癌组织中均有表达,而且阳性率较为接近,说明gp78在这两种肿瘤组织中不适合作为检测标志物。而在结肠癌,前列腺癌中,gp78在正常组织无表达,在肿瘤组织中有特异表达,说明gp78对这两种肿瘤有较为灵敏的指示作用,是潜在的肿瘤分子标志物。而且gp78在前列腺癌组织中呈非均一分布。gp78敲除后会较低HCT116细胞系中MMP-9和MMP-2的活性。