论文部分内容阅读
STAT3基因表达产物是信号转导和转录激活因子家族(signal transducers andactivators of transcription，STATs)成员，是一类将细胞因子受体和生长因子受体传递的细胞外信号传送至细胞核的转录因子，与细胞的增殖、分化及凋亡密切相关。MDR1（Multidrug resistance）基因产物是P-糖蛋白(Permeability–glycoprotein, P-gp)，其功能与排出内源性代谢产物、细胞毒性物质及某些疏水化疗药物相关，在耐化疗药物肿瘤细胞中多高表达。RNAi（RNAinterference）技术通过在细胞内导入小干扰RNA(smallinterfering RNA， siRNA)方法抑制细胞特异基因表达，本实验通过构建表达MDR1-SiRNA和STAT3-SiRNA的重组质粒，经由脂质体介导转染A549人肺腺癌细胞，提取总蛋白和总RNA，通过PCR技术，Western blot检测MDR1与Stat3在mRNA、蛋白的表达水平，应用MTT法和流式细胞仪检测细胞凋亡及生长抑制情况，结果提示pEGFP-siMDR1转染组的细胞的mRNA表达比值(MDR1/β-actin)=0.376±0.097共转染组细胞的mRNA表达比值(MDR1/β-actin)=0.262±0.105，与空白组相比，MDR1基因mRNA表达减少到42.1%，pEGFP-siStat3转染组和共转组stat3基因mRNA表达分别减少到20.9%和18.2%。pEGFP-siMDR1转染组，pEGFP-siSTAT3转染组，pEGFP-siSTAT3、pEGFP-siMDR1共转组Stat3蛋白表达抑制率(Stat3/β-actin)分别为36%、56%、71%，MDR1-siRNA重组细胞组和共转组P-gp的表达水平分别降为67.3%、53.8%。流式细胞技术检测细胞凋亡率，发现pEGFP-siMDR1转染组和pEGFP-siSTAT3转染组凋亡率为16.47%、22.05%，共转组凋亡率为40.53%，结果提示采用RNAi技术联合沉默Stat3和MDR1基因可抑制A549人肺腺癌细胞生长，另外MDR1基因作为细胞耐药基因，我们的实验为将来肿瘤基因治疗以及其联合化疗药物协同治疗提供理论基础和前期准备工作。