目的：初步优选出三棱莪术药对中抑制HaCaT细胞(即人永生化上皮细胞)增殖的有效成分剂量组合,并对其抑制机理进行研究,为进一步研究该药对治疗银屑病提供科学理论依据。方法：(1)采用MTT法检测IFN-γ(干扰素-Y)不同浓度(0、5、10、20、50、 100ng/mL)对HaCaT细胞增殖的影响,并选出IFN-γ促HaCaT细胞增殖的最佳浓度；(2)采用MTT法检测三棱中琥珀酸、芦丁、香草醛、亚油酸、芒柄花素、山柰素、香草酸、棕榈酸等以及莪术中莪术油、异龙脑、吉马酮、姜黄素、龙脑、莪术二酮、β-胡萝卜素、莪术醇等有效成分不同浓度(0,5,10,20,50, 100mol·L-1)和不同时间(24h、48h、72h)对HaCaT细胞增殖的影响,各药物组均用最佳促HaCaT细胞增殖的浓度的IFN-γ对HaCaT细胞促增殖,并设置同样浓度IFN-γ组以及空白组。(3)采用正交实验和MTT法优选出一组抑制HaCaT细胞增殖的三棱和莪术有效成分的最佳剂量组合,同时设置空白组和IFN-γ组,并对正交实验结果进行验证。(4)采用ELISA法检测三棱莪术最佳组合、各有效单体成分(香草酸、琥珀酸、异龙脑和姜黄素)、IFN-γ以及空白组作用过的HaCaT细胞分泌IL-2和TLR-2的含量。(5)采用Western blot法观察三棱莪术最佳组合、各有效单体成分(香草酸、琥珀酸、异龙脑和姜黄素)、IFN-γ以及空白组对HaCaT细胞hedghog信号通道蛋白PTCH1的表达的影响。结果：(1)干扰素-γ能促进HaCaT细胞增殖且呈浓度依赖性趋势,与空白组相比,浓度为5ng/mL的IFN-γ对HaCaT细胞就有一定的促增殖作用(P<0.05),浓度为50ng/mL的IFN-γ对HaCaT细胞的促增殖作用最明显基本达到最大效应(P<0.01)。(2)三棱中芦丁、芒柄花素、香草醛、亚油酸、山柰素、棕榈酸等有效成分以及莪术中吉马酮、龙脑、莪术二酮、β-胡萝卜素、莪术醇等有效成分在24h、48h、72h的不同浓度均无明显抑制HaCaT细胞增殖的作用；而莪术油24h的全部浓度以及异龙脑、姜黄素、琥珀酸、香草酸等有效成分在24h的浓度为10mol·L-1、20mol·L-1、50mol·L-1、100mol·L-1对HaCaT细胞增殖均有抑制作用,其中莪术油24h的20mol·L-1和50mol·L-1浓度以及异龙脑24h浓度为20mol·L-1对HaCaT细胞抑制作用最强。因此,选出的三棱有效成分为香草酸和琥珀酸,莪术有效成分为异龙脑和姜黄素,剂量都选3个,即10、20、50,时间24h,按L9(3‘)进行正交实验。(3)正交实验的主次关系为：琥珀酸>姜黄素>异龙脑>香草酸,最佳剂量组合为：50mol·L-1香草酸、50mol·L-1琥珀酸、2Omol·L-1异龙脑和50mol·L-姜黄素。(4) ELISA实验结果：与空白组相比,IFN-γ组的IL-2含量有明显差异(P<0.01); INF-γ组的TLR-2含量有差异(P<0.05)；各药物组的IL-2含量均有显著差异(P<0.001),均有明显减少,各药物组的TLR-2含量均有明显差异(P<0.01),均有不同程度减少。其中以三棱莪术有效成分最佳剂量组合组的IL-2和TLR-2含量最少,IFN-γ组的IL-2和TLR-2含量最多。(5)蛋白印迹试验表明各药物组作用于HaCaT细胞后均能下调hedghog信号通道的蛋白PTCH1的表达,其中以三棱莪术有效成分最佳剂量组合组下调蛋白PTCH1表达的作用最强,IFN-γ组下调蛋白PTCH1的表达作用最弱。结论：(1)三棱中香草酸和琥珀酸以及莪术中异龙脑和姜黄素对HaCaT细胞增殖均有抑制作用,三棱莪术有效成分组合组对HaCaT细胞增殖有明显的抑制作用；(2) IFN-γ可增强HaCaT细胞分泌IL-2、TLR-2;(3)各药物组可使活化的HaCaT细胞IL-2和TLR-2的分泌明显降低并以三棱莪术有效成分组合组降低最多,说明IL-2和TLR2的活化在银屑病角质形成细胞异常增殖中可能发挥了重要作用。提示三棱莪术药对治疗银屑病可能与该药对的有效成分能抑制HaCaT细胞分泌IL-2和TLR-2有关。(4)各药物组均能下调hedghog信号通道蛋白PTCH1表达,以三棱莪术有效成分组合组作用最强,提示中药三棱莪术药对治疗银屑病的机制可能与阻断hedghog信号通道从而PTCHl蛋白下调有关。