论文部分内容阅读
稻瘟病菌引起的稻瘟病是威胁水稻产量的重大病害,关于其侵染机制的研究一直是植物病理学的研究热点。稻瘟病菌接触水稻后的互作初期是决定稻瘟病发生与否的关键时期,该时期效应蛋白的表达对病菌成功侵染至关重要。转录因子是调控基因表达的重要因子,不仅可以调控稻瘟病菌的生长发育,也影响病菌的致病性。本文旨在筛选出在稻瘟病菌侵染初期高效表达的转录因子,并在后续的研究中分析这些转录因子对效应蛋白表达的调控作用,为在转录水平上研究稻瘟病菌和水稻的互作机制提供前提和参考。我们在真菌转录因子数据库中选择了 486个稻瘟病菌转录因子作为研究目标。首先,对营养生长阶段(菌丝孢子阶段)的材料进行了转录因子的RT-PCR,剔除了 160个在营养生长阶段能够高效表达的转录因子。接着,对剩下的326个转录因子在稻瘟病菌接种水稻的12h和36h时段进行实时定量PCR,发现相对于营养生长阶段有96个转录因子在接种后12h或36h表达量增加了 10倍以上。其中有22个转录因子在接种后12h的相对表达量增加了 100倍以上,有17个转录因子增加了 50倍以上,剩余的57个相对表达量增加的倍数在10到50之间。我们对这侵染初期诱导表达的96个转录因子进行了分类,发现属于Zn2Cys6类转录因子最多,有47个;其次是属于C2H2 zinc finger类转录因子,有23个;另外,有6个属于HMG类转录因子;5个属于Nucleic acid-binding,OB-fold类转录因子;4个属于Homeodomain-like类转录因子;属于Transcription factor jumonji、Zinc finger,CCHC-type、Winged helix repressor DNA-binding 和 bZIP 类转录因子的各有 2 个;属于 Heteromeric CCA AT factors、Myb 和 Zinc finger,BED-type predicted类转录因子的各有1个。为了详细分析侵染阶段诱导表达的转录因子在侵染各个时期的表达情况,我们选择了 32个高表达的转录因子,qRT-PCR分析其在稻瘟病菌接种水稻4小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时、72小时和96小时九个时间段的表达情况。结果发现,有25个转录因子在各时间段呈现出先低后高再低的表达趋势,7个转录因子在整个时间段表达成波动型,即出现反复的升高和降低。另外发现这些转录因子在侵染48小时后表达都出现了明显的下降。这些结果表明,32个转录因子虽都在侵染阶段高度表达,但表达趋势呈现出多样性。