【摘 要】
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根据来源于SLEmAbVCDR2和CDR3的TP氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,全序列合成核苷酸,对其进行序列测定.测序验证正确后,构建TP与MS原核融合表达载体pMTY4-TP,同时构建
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根据来源于SLEmAbV<,H>CDR2和CDR3的TP氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,全序列合成核苷酸,对其进行序列测定.测序验证正确后,构建TP与MS<,2>原核融合表达载体pMTY4-TP,同时构建了TP与凋亡相关基因TFAR19cDNA融合表达载体pMTY4-TP-TFAR19.诱导后MS<,2>-TP和MS<,2>-TP-TFAR19.融合蛋白在大肠杆菌pop2136中得到高效表达.表达的融合蛋白包涵体经过变性、复性和DEAE阴离子交换层析纯化后,对TP的转导活性进行了体外研究.该实验证明TP能转导与其融合的生物大分子蛋白质和核酸进入细胞内并且发挥这些大分子的生物学活性.通过免疫印记检测到与TP融合表达的蛋白质MS<,2>lh后即可进入细胞.FACS结果提示TP能以剂量依赖方式转导与其融合的TFAR19进入核内细胞的凋亡.与TP结合的pEGFP被导入细胞,24h后即可在荧光显微镜下观察到绿色荧光,随时间的延长荧光强度增加,表达绿色荧光蛋白的细胞数增加.TP转导活性的研究结果提示TP可以作为功能蛋白、寡聚核苷酸和DNA进入细胞的高效通用载体,为信号转导的研究、基因治疗和药物导入提供新的实验方法.
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