不同产地桑叶中功能成分的含量分析及桑叶体外生物活性的研究

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桑叶是一种传统中药材,富含多酚类及生物碱类活性成分,具有优良的抗氧化活性、降血糖活性以及抗炎症、抗肿瘤、减肥美容等医疗及保健功能,在食品、药品以及保健品领域已获得部分应用且应用前景广阔。本文以桑叶为实验材料,建立了新的液相色谱-质谱联用技术对其中的酚类活性成分和生物碱类活性成分进行定性和定量,优化了质谱条件,建立了新的方法,可同时鉴定出5种多酚类化合物;之后对不同产地桑叶中的活性成分含量以及抗氧化性能、糖苷酶抑制能力的影响进行了比对;最后对所有测定参数进行了主成分分析,进一步研究了不同参数间的内部联系,并筛选出适合用于保健品、药品业用的桑叶原料产地。具体研究结果如下:1.对5中多酚类成分和DNJ、fagomine的ESI源下的质谱行为进行了分析,并对质谱条件进行了优化。随后确立了新型的HPLC-ESI-MS检测方法,可同时检测5种多酚类成分,使用氨基柱对DNJ和fagomine进行分离,建立了新的HILIC-MS/MS方法,避免了生物碱衍生化的不确定性和繁琐的程序,同时大大缩短了分离时间,可完成对DNJ和fagomine的检测,并验证了方法的稳定性与可行性。2.利用建立的液质联用的方法对来自于全国8个主要蚕桑产区秋季桑叶中的活性成分进行定性及定量分析,测定了不同产区样品中总酚、总黄酮含量,并探究了不同产区对活性成分含量及总酚总黄酮含量的影响及可能造成影响的原因。结果表明:在桑叶提取物中可分离出荞麦碱、DNJ、绿原酸、异槲皮苷、芦丁、槲皮素和山奈素7种成分,其中山奈素和槲皮素含量较低,在部分样品中存在。桑叶中绿原酸含量较高,最高可达到10.050±0.143 mg/g,大部分含量分布在2-8mg/g。DNJ、fagomine和酚类成分含量随地域变化均有显著差异,广东地区样品中的DNJ和fagomine整体含量较高,重庆涪陵地区样品的fagomine含量最高,因此这两个地区可作为秋天桑叶DNJ和fagomine的优势产区。广东、广西、重庆和安徽地区中酚类含量普遍较高,总酚含量和总黄酮含量也普遍较高,因此这4个地区可以作为桑叶酚类成分和黄酮类成分的优势产区。3.对不同产地桑叶提取物的抗氧化活性及α-糖苷酶抑制能力进行了比对分析。为了全面比对抗氧化性的优劣,我们采用了DPPH、ABTS、FRAP三种方法来进行分析。结果表明桑叶具有良好的抗氧化活性和糖苷酶抑制能力,但随产区不同,其活性大小也会产生变化。广东、广西、重庆的、安徽四个产区的三种抗氧化能力均高于其他产区,因此广东、广西、重庆和安徽地区适于种植在抗氧化方面应用的桑叶资源。江西产区样品的糖苷酶抑制能力最强,其次为广东和广西产区样品,推测是因为桑叶提取物中其他活性成分也具有糖苷酶抑制能力,或者不同成分在糖苷酶抑制能力方面存在协同作用导致的结果,仅靠DNJ和fagomine含量无法代表样品的糖苷酶抑制能力。4.根据获得的所有数据结果对不同产地样品提取物进行主成分分析。结果表明,主成分1代表了抗氧化活性相关数据,主成分2主要代表了DNJ的含量。通过分析可知,绿原酸、异槲皮苷和芦丁的含量及总酚总黄酮含量主要是与桑叶的抗氧化活性相关。而α-糖苷酶抑制能力则和DNJ含量、fagomine含量相关性不高,表明桑叶的α-糖苷酶抑制能力不是单纯由这两种成分决定,可能与桑叶中其他活性成分及活性成分之间的相互作用相关。
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