基于纳米酶催化的有机磷农药生物条形码分析方法研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 3次 | 上传用户:hyhlj
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农产品质量与安全是全球关注的民生大事,农药残留是最重要的危害因子之一,研究开发高灵敏快速检测农产品中农药残留检测方法是第一时间发现问题、科学监管的重要手段,具有科学价值和现实意义。本论文基于胶体金纳米信号放大原理结合DNA生物条形码识别和纳米酶技术,研究检测农药残留的生物条形码免疫分析方法,实现农药残留高灵敏快速检测。1.首先开展了基于单金属纳米酶Pt催化的生物条形码免疫分析方法研究。通过柠檬酸三钠还原法合成纳米酶Pt颗粒和胶体金颗粒,结合生物条形码免疫分析技术,并制备成胶体金探针和磁珠探针,建立基于纳米酶Pt催化的生物条形码免疫分析方法,实现农药对硫磷的单残留检测。该分析方法的IC50为0.79μg?kg-1,检测限(LOD:IC10)为2.04 ng?kg-1。在水、梨、卷心菜和大米样品中添加回收率是91.06%~114.44%,相对标准偏差(RSDs)从3.59%到15.75%。与GC-MS/MS分析方法进行确证分析,相关性良好。与CLEIA比较,检测限提高1个数量级,结果表明基于纳米酶Pt催化的生物条形码免疫分析方法用于农药的痕量检测准确和可靠。2.在Pt催化的生物条形码免疫分析基础上,进一步开展了基于纳米酶Au@Pt催化的生物条形码免疫分析方法检测对硫磷研究。通过抗坏血酸还原法合成纳米酶Au@Pt颗粒,把DNA链及其互补链分别标记到胶体金颗粒和纳米酶Au@Pt颗粒,制备胶体金探针和纳米酶Au@Pt探针,构建了Au@Pt催化的生物条形码免疫分析方法。该方法的LOD为2.13 ng?kg-1,IC50为1.75μg?kg-1。在大米、梨、苹果和卷心菜样品基质中添加回收率是73.12%~116.29%,RSDs介于5.59%~10.87%之间。在基于天然酶HRP催化的对硫磷生物条形码免疫分析方法中,方法的IC50和LOD分别为5.83μg?kg-1和20.82 ng?kg-1。与天然HRP催化的生物条形码免疫分析相比,该分析方法的LOD提高1个数量级。结果表明基于Au@Pt纳米酶催化的生物条形码免疫分析法应用在农产品农药残留检测灵敏度更高、稳定性更好。3.在Au@Pt催化的生物条形码免疫分析方法检测对硫磷的基础上,进一步开展基于纳米酶Au@Pt催化的农药多残留生物条形码免疫分析研究。通过制备对硫磷、三唑磷和毒死蜱三种农药相应的胶体金探针和磁性纳米探针、把羧基修饰DNA链标记到氨基修饰的96孔板,构建了基于纳米酶Au@Pt催化的农药多残留生物条形码免疫分析方法,实现对硫磷、三唑磷和毒死蜱的多残留检测。在该分析方法中对硫磷、三唑磷和毒死蜱的LOD分别为9.88 ng?kg-1、3.91 ng?kg-1和1.47 ng?kg-1,IC50分别为0.74μg?kg-1、0.65μg?kg-1和1.06μg?kg-1。在卷心菜、苹果、梨和大米基质中,添加回收率是71.26%~117.47%,RSDs的范围是2.92%~14.52%。结果表明该方法同时检测对硫磷、三唑磷和毒死蜱方法可靠,为农药多残留检测提供了高灵敏度分析方法。
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