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目的 用构建的反义DNA MTase基因片段真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721，以空SMMC-7721细胞作为空白对照，以转染正义DNA MTase基因片段真核表达载体的SMMC-7721细胞作为阴性对照，观察肝癌细胞内源性DNA MTase基因mRNA表达的变化、E-Cadherin基因启动子区域甲基化状态改变、抑癌基因E-Cadherin mRNA和蛋白表达的变化及肝癌细胞生物学行为的改变，探讨DNA甲基化异常、抑癌基因、肝细胞癌间的相关性，分析肝细胞癌发生机理，探讨肝癌治疗的新方法。方法 分别将EcoRＩ/XhoＩ、EcoRＩ/XbaＩ酶切位点添加于扩增产物长度为353bp和193bp的PCR引物5′端，进行反转录PCR扩增，得到正、反义人DNA MTase基因片段，产物用相应内切酶切割后分别定向连入质粒载体pCl-neo的XhoＩ/EcoRＩ、EcoRＩ/XbaＩ克隆位点上，然后将构建成的正、反义重组载体进行酶切鉴定和测序确认。用脂质体法将重组载体转染入肝癌细胞SMMC-7721，将转染正义载体的SMMC-7721细胞集落命名为7721-S，转染反义载体的SMMC-7721细胞集落命名为7721-AS，未转染的SMMC-7721细胞命名为7721。用RT-PCR方法检测细胞内源性DNA MTase基因mRNA和E-Cadherin基因mRNA表达量，甲基化特异的PCR检测E-Cadherin启动子区域甲基化状态改变，共聚焦激光扫描显微镜观察细胞形态变化，透射电镜观察细胞超微结构，MTT法绘制生长曲线，行双层软琼脂克隆形成试验，流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及E-Cadherin表达，免<WP=7>疫组织化学染色检测E-Cadherin表达。结果 酶切鉴定和测序分析证明构建的载体与设计一致。重组载体转染入SMMC-7721细胞并表达。7721-AS内源性DNA MTase基因mRNA表达量较7721细胞减少。7721-AS中E-Cadherin基因启动子区域去甲基化。7721-AS E-Cadherin基因mRNA和蛋白的表达量较7721增多。7721-AS的异型性减小，恶性表型产生了一定程度的抑制或逆转。结论 DNA MTase反义基因可以减低SMMC-7721内源性DNA MTase基因mRNA的表达。DNA MTase反义基因可使E-Cadherin基因启动子区域去甲基化。DNA MTase反义基因可使SMMC-7721抑癌基因E-Cadherin mRNA和蛋白表达量增加。DNA MTase反义基因使SMMC-7721恶性表型产生一定程度的抑制或逆转。DNA MTase反义基因对肝癌的治疗有潜在的应用价值。