第一部分精确腹腔热灌注化疗对胃癌患者免疫功能的影响目的：探讨精确腹腔热灌注化疗（Hyperthermic Intraperitoneal PerfusionChemotherapy, HIPEC）对进展期胃癌患者免疫功能的影响。方法：运用流式细胞仪检测42例进展期胃癌患者全身静脉化疗前后、HIPEC治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞以及NK细胞水平。1.实验分组将我院2012年12月～2014年03月收治的42例进展期胃癌（病理证实）患者，按照治疗方法的不同分为静脉化疗组和HIPEC组。（1）静脉化疗组（20例）：术前影像学评估或术中肉眼评估肿瘤未突破浆膜层，且无远处转移，有手术适应症，无明显HIPEC适应症。于术后10～14天切口拆线后开始行全身静脉化疗，采用Xelox方案：注射用奥沙利铂130mg/m2，第1天；卡培他滨1g/m2/d，一日两次，第1～14天。（2）HIPEC组（22例）：术前影像学评估或术中肉眼评估肿瘤突破浆膜层，或有腹膜种植转移，有HIPEC适应症。于减瘤术毕，采用我院自主研发的BR-TRG-I型体腔热灌注治疗系统行HIPEC，具体方法为将5-Fu、DDP或奥沙利铂（单药或两药联用，剂量按体表面积参照全身静脉化疗用量，分数次使用）溶于加有1500～4000ml生理盐水的灌注袋中混匀加热，体外循环灌注入患者腹腔内行HIPEC治疗。灌注温度设定为43℃、灌注速度设定为400～600ml/min，每次灌注时间设定为90min，视患者病情治疗3～5次。2.标本收集两组患者均在治疗前以及治疗后一周左右于清晨抽肘正中静脉血2ml，加入到乙二胺四乙酸三钾（EDTA-K3）抗凝的真空管中。3.标本处理使用直接免疫荧光标记全血溶血法检测两组胃癌患者治疗前后淋巴细胞各亚群水平。取流式细胞仪上样管，每管加入100ul抗凝全血，然后分别加入20ul荧光素标记的CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD16+CD56+单克隆抗体，充分混匀，避光室温孵育20min；然后向每管中加入红细胞裂解液1000ul，震荡混匀，避光孵育20min后，离心2000r/min，5min，弃去红色上清液。加2mlPBS，离心2000r/min，5min洗涤两遍；如发现红细胞裂解不完全，可重复上述步骤；最后再向每管加入500ulPBS，震荡混匀以重悬细胞，上机检测。4.淋巴细胞分析应用Flow-Jo软件进行检测分析两组胃癌患者治疗前后T淋巴细胞、B淋巴细胞以及NK细胞水平的百分比结果。5.数据处理及统计方法统计学方法采用SPSS19.0统计学软件处理数据，数值用均值和标准差（X±S）表示。分别采用两个独立样本的t检验、秩和检验进行比较，P <0.05表示有统计学意义。结果：1.静脉化疗组患者外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞百分比均值分别为：70.71±9.01%、37.20±7.18%、26.36±9.95%、4.62±4.39%、16.92±8.62%；HIPEC组患者外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞百分比均值分别为：60.64±16.18%、25.70±14.32%、25.97±9.64%、4.35±5.64%、24.47±14.54%；静脉化疗组患者外周血CD4+/CD8+比值为：1.32±0.51，HIPEC组患者外周血CD4+/CD8+比值为：0.82±0.54。HIPEC组患者与静脉化疗组患者相比，CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞百分比下降，CD4+/CD8+比值下降，差异具有统计学意义(P <0.05)。2.静脉化疗组患者治疗前外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞百分比均值分别为：70.71±9.01%、37.20±7.18%、26.36±9.95%、4.62±4.39%、16.92±8.62%；治疗后CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞百分比均值分别为：60.68±13.10%、23.86±9.05%、27.93±10.54%、3.39±2.86%、25.79±13.41%。治疗前外周血CD4+/CD8+比值为：1.32±0.51；治疗后CD4+/CD8+比值为：0.71±0.36。治疗后与治疗前相比，CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞百分比下降，CD4+/CD8+比值下降；NK细胞百分比上升，差异具有统计学意义(P <0.05)。3. HIPEC组患者治疗前外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞百分比均值分别为：60.64±16.18%、25.70±14.32%、25.97±9.64%、4.35±5.64%、24.47±14.54%；治疗后CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞百分比均值分别为：75.46±8.32%、41.50±10.18%、26.48±7.33%、5.66±5.38%、11.95±6.65%。治疗前外周血CD4+/CD8+比值为：0.82±0.54；治疗后CD4+/CD8+比值为：1.41±0.52。治疗后与治疗前相比，CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞百分比上升，CD4+/CD8+比值上升；NK细胞百分比下降，差异具有统计学意义(P <0.05)。结论：1.随着进展期胃癌患者病情的进展，荷瘤宿主的细胞免疫功能进一步降低。2.全身静脉化疗在降低肿瘤负荷以及缓解由肿瘤细胞直接诱导的免疫抑制的同时，对荷瘤宿主免疫系统也进行非选择性攻击，抑制了荷瘤宿主的免疫功能。3.HIPEC可以提高荷瘤宿主的细胞免疫功能，在化疗药物热增敏的基础上，此可能是其提高疗效更进一步的理论依据。4.应用流式细胞术检测胃癌患者的免疫功能，可以使我们更好的了解荷瘤宿主的细胞免疫功能状态，通过监测免疫功能的恢复程度可以评估不同治疗方法的治疗效果。第二部分B超定位穿刺置管腹腔热灌注化疗治疗恶性腹水的临床疗效观察目的：探讨B超定位穿刺置管HIPEC治疗恶性腹水的方法、可行性以及临床初步疗效。方法：回顾性分析我院2008年3月～2012年3月收治的42例恶性腹水患者，将其分为两组，治疗组21例行B超定位穿刺置管HIPEC，对照组21例行腹腔镜辅助HIPEC。对两组患者的治疗效果、术后并发症及住院费用进行对比，并对临床疗效进行随访。每例患者视病情治疗3～5次，灌注液选用生理盐水(1.5～4L)，灌注温度设定为43℃、灌注速度设定为400～600ml/min，每次灌注时间设定为90min，灌注药物选用DDP、奥沙利铂、5-Fu单药或两药联用，剂量按体表面积参照全身化疗用量，分数次使用，灌注过程中严密监测患者生命体征变化。对所有患者进行随访，患者术前及最后一次灌注后一周进行KPS评分，评估患者病情缓解情况及生活质量。于治疗后两周复查B超或CT，评估腹水消退状况，以后根据患者病情至少每月随访1次，直至死亡，评估腹水变化及肿瘤进展状况。观察患者灌注过程中的生命体征变化情况，有无腹痛、腹胀等不良反应，灌注后监测患者血常规及各项生化指标，有无腹泻、便秘、恶心呕吐等，观察有无肠梗阻、包裹性积液、腹腔感染等并发症发生。全部数据使用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。结果：两组患者顺利完成HIPEC，成功率100%。所有患者经第一次HIPEC放出腹水后第二天腹水引出量一般为200～500ml，以后逐日减少，一周后腹水引出量一般为5～30ml/d。且一般状况、精神状态较术前好转，食欲改善，体重增加，Karnofsky生活质量评分升高20～30，贫血症状明显缓解，近期临床疗效满意。治疗组完全缓解（CR）20例，部分缓解（PR）1例。对照组完全缓解（CR）18例，部分缓解（PR）3例。所有患者HIPEC治疗期间生命体征无明显异常，除暂时性发热、腹胀、腹痛外无其它不适。三次HIPEC治疗前后动态复查肝肾功能未发现明显异常。I～Ⅱ度骨髓抑制5例；轻度胃肠道反应2例，均经对症处理后缓解。无腹腔感染、粘连性肠梗阻等并发症病例出现。所有患者均为随访资料完整病例，均随访至死亡为止，平均随访时间为14个月，随访截止时间为2013年5月。治疗组18例患者死亡，生存期4个月～13个月，中位生存期7个月，3例患者分别存活4个月、6个月、7个月仍健在；对照组21例患者均已死亡，生存期2个月～9个月，中位生存期6个月，3例出现戳孔种植转移的患者分别在治疗后1个半月及2个月、3个月死亡。统计学分析表明：治疗组患者临床疗效、KPS评分升高值与对照组无明显差异（P﹥0.05， P﹥0.05）；但治疗组手术时间、住院医疗费用、戳孔种植转移发生率明显好于对照组（P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01）。结论：1. B超定位穿刺置管HIPEC治疗恶性腹水可充分应用微创外科优势，能够提高患者的KPS评分并延长生存期。2.相对腹腔镜辅助HIPEC, B超定位穿刺置管HIPEC技术操作简便、省时，有着很好的临床应用前景。