【摘 要】
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目的 观察水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并进一步研究水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞G蛋白信号转导通路的影响。从而探讨中药水蛭用于防治PVR
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目的 观察水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并进一步研究水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞G蛋白信号转导通路的影响。从而探讨中药水蛭用于防治PVR的作用机制。 方法 (1)采用消化培养法,对牛视网膜色素上皮细胞进行体外培养。 (2)采用不同浓度的凝血酶,利用牛第3代RPE细胞,作用24小时后以MTT法测定OD值,筛选出最佳药物浓度。 (3)选择128mg/ml中药水蛭提取液和0.5NIHU/ml凝血酶,采用三种加药方式(中药和凝血酶同时加、先加凝血酶后加中药、先加中药后加凝血酶),选取20分钟时间点,观察牛第3代RPE细胞生长状态,并以MTT法测定OD值。 (4)选取20分钟时间点,采用3种加药方式,分别测定细胞内PKC活性、细胞内每毫克蛋白质催化产生的cAMP量和细胞内游离钙离子含量。 结果 (1)凝血酶以下浓度均有不同程度促进牛RPE细胞增殖的作用:2.5 NIHU/ml、8NIHU/ml (p<0.05);0.5NIHU/ml、1NIHU/ml、2NIHU/ml、4NIHU/ml (p<0.01),其中0.5 NIHU/ml和2 NIHU/ml作用最佳(p<0.01),具有可重复性。 (2)三种加药方式实验结果显示:①凝血酶组与空白组比较,OD
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