灰树花(Grifola frondosa)中锌的存在形态分析

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锌是人体必需的微量元素之一,对人体的各种生理活动起着重要的调节作用。灰树花是一种对人体具有多种保健功效的食(药)用真菌,含有蛋白质、多糖及矿物元素等多种生物活性物质,在抗肿瘤、抗病毒及免疫调节等方面具有很好的保健作用。本文以灰树花为原料,结合微量元素分析模型,将微量元素锌的存在形态分为可溶态和悬浮态、无机态和有机态、有机结合态。优化影响锌元素提取效果的条件,使用不同提取液提取有机结合态,利用微波消解-火焰原子吸收光谱法测定各形态中锌的含量及分布。锌元素的形态分析可为灰树花的开发利用提供理论依据。主要研究结果如下:1、通过单因素实验和正交实验,优化了锌元素的提取工艺,对灰树花水浴液中锌元素进行了含量测定及形态分析,采用0.45 μm微孔滤膜将水浴液中的锌元素分为可溶态和悬浮态,并采用微波消解-火焰原子吸收光谱法测定了锌元素的各初级形态的含量。结果表明:灰树花中微量元素锌的初级形态多以可溶态形式存在,最佳的提取条件为温度40℃,时间110 min,料液比1:45,在此条件下,可溶态中锌元素的提取率达到58.77%,残渣中也存在一部分锌,含量达到40.68%。锌在水提液中的可溶解率很高,可达到99%,悬浮态基本没有。2、在微量元素锌初级形态分析的基础之上,又进行了锌元素的次级形态分析。采用D-101大孔吸附树脂将可溶态锌分为无机态锌和有机态锌,并采用微波消解-火焰原子吸收光谱法测定了锌元素的各次级形态的含量。实验设定上样量、pH、HNO3浓度以及洗脱剂类型、用量、流速等为无机态和有机态分离提取的影响因素,单因素和正交实验的结果说明:灰树花中可溶态锌中无机态分离提取的最佳条件组合是:pH4, HNO3浓度3%,用量4BV,流速2.5 mL/min;有机态分离提取的最佳条件为:丙酮洗脱剂、洗脱剂用量3BV、流速为2 mL/min。在此条件下,无机态锌的含量达到41.04 μg/g,在可溶态中的分布达到76%左右;而有机态锌的含量只有12.50 μg/g,在可溶态中的分布达到23%左右。由此可以看出,灰树花中可溶态锌主要以无机态形式存在,无机态锌的含量是有机态锌的含量的3倍多。3、采用CC14溶剂和2 mol/L的HC1溶液从水浴残渣中提取有机态和无机态,测量其中的锌含量。结果表明:残渣中有机态锌的含量为3.21 μg/g,在残渣中的分布为8.63%;无机态锌的含量为33.27μg/g,分布为89.48%。由此可以看出,残渣中锌元素主要以无机态形式存在,无机态锌的含量是有机态的10倍左右。4、利用不同的提取液从可溶态和残渣中提取有机结合态,其中水溶态中的有机结合态是水溶性蛋白质和水溶性多糖,残渣中的有机结合态分别是盐溶性蛋白质、碱溶性蛋白质和碱溶性多糖。灰树花中锌的有机结合态分为多糖结合态和蛋白质结合态,其中蛋白质结合态为主要的存在形态,水溶性蛋白质的含量最多。实验发现,有机结合态主要存在于水溶态中,所以,水溶性蛋白质和水溶性多糖是进一步纯化研究的理想材料。
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