【摘 要】
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目的:
观察苦参素(oxymatrine,OM)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalallergic encephalomyelitis,EAE)大鼠的临床表现、脊髓病理变化、中枢神经系统(central ner
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目的:
观察苦参素(oxymatrine,OM)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalallergic encephalomyelitis,EAE)大鼠的临床表现、脊髓病理变化、中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎症浸润细胞凋亡及凋亡相关蛋白NF-κBp65,Bcl-2,Bax的影响,分析苦参素在EAE防治中的作用及可能的机制,为临床应用提供实验依据。
方法：
1、实验动物分组:将40只雌性wistar大鼠随机分为4组:正常组、模型组、OM小剂量组(OM1,100mg·kg-1)、OM大剂量组(OM2,150mg·kg-1)。
2、模型建立:应用四肢足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的抗原乳剂,并辅以注射浓度为6.0×109个菌体/ml的百日咳疫苗0.1ml,诱导大鼠建立EAE模型。免疫后每日观察实验动物的活动情况,记录发病动物的体重变化、神经功能评分、潜伏期、发病率。
3、给药方式:正常组和模型组自免疫当天起每天一次腹腔注射生理盐水,连续注射18天；OM1组自免疫当天起每天一次腹腔注射苦参素注射液(100mg·kg-1),连续给药18天；OM2组自免疫当天起每天一次腹腔注射苦参素注射液(150mg·kg-1),连续给药18天。
4、组织取材:在第18天大鼠心脏灌流,取脊髓腰膨大置于4％的多聚甲醛中固定,石蜡包埋,切片。
5、指标检测:HE染色观察脊髓组织病理学改变,TUNEL法观察炎症浸润细胞的凋亡情况,免疫组织化学方法观察凋亡相关蛋白NF-κBp65,Bcl-2、Bax的表达。
结果：
1、动物潜伏期、发病率观察:正常组无动物发病,OM1组、OM2组发病潜伏期较模型组延迟,OM2组发病潜伏期较OM1组延迟。OM1组、OM2组动物发病率低于模型组(P>0.05),OM2组动物发病率低于OM1组发病率(P>0.05)。
2、体重变化及神经功能评分变化:实验期间正常组动物体重持续上升,OM1组、OM2组、模型组三组动物平均体重整体呈下降趋势,OM1组、OM2组、模型组平均体重变化与正常组相比P<0.05,OM1组、OM2组平均体重变化较模型组小(P<0.05),OM2组平均体重变化较OM1组小(P>0.05)。模型组动物平均神经功能评分高于OM1组和OM2组(P<0.05),OM2组动物平均神经功能评分低于OM1组(P>0.05)。
3、组织病理学观察:正常组动物脊髓内无炎性细胞浸润,模型组、OM1组、OM2组动物脊髓内均存在炎性细胞浸润,OM1组、OM2组脊髓内炎症浸润细胞比模型组少,OM2组炎症浸润细胞比OM1组少。
4、CNS炎症浸润细胞凋亡阳性率比较:模型组、OM1组、OM2组细胞凋亡阳性率均高于正常组(P<0.05),OM1组、OM2组细胞凋亡阳性率高于模型组(P<0.05),OM2组高于OM1组(P<0.05)。
5、NF-κBp65、Bcl-2、Bax表达:OM1组、OM2组NF-κBp65、Bcl-2表达低于模型组(P<0.05),且OM2组低于OM1组(P<0.05)；OM1组、OM2组、模型组Bax表达相差不大(P>0.05)。
结论：
苦参素对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎具有明显的防治作用,其作用机制可能是通过抑制中枢神经系统细胞NF-κBp65、Bcl-2的表达,重新调整Bcl-2、Bax之间的平衡,增加CNS炎症浸润细胞的凋亡,减少CNS炎症浸润细胞的数目,从而减轻EAE的病情。
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