【摘 要】
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目的:研究天津海河水中超级耐药细菌（super antibiotic resistance bacteria,SARB）及超级耐药基因（super antibiotic resistance genes,SARGs）的污染特征。方法:对天津海河上游、中上游、中下游和下游的水样进行半年的采集,并采用正压过滤法及核酸吸附柱-洗脱法分别富集水中细菌和胞外核酸,利用荧光定量PCR技术对其10种SARGs进
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目的:研究天津海河水中超级耐药细菌（super antibiotic resistance bacteria,SARB）及超级耐药基因（super antibiotic resistance genes,SARGs）的污染特征。方法:对天津海河上游、中上游、中下游和下游的水样进行半年的采集,并采用正压过滤法及核酸吸附柱-洗脱法分别富集水中细菌和胞外核酸,利用荧光定量PCR技术对其10种SARGs进行定量检测;基于宏基因组测序对于海河水中的菌群及基因分布进行检测;利用耐碳青霉烯类及耐多粘菌素类显色培养基筛选超级耐药细菌进行MIC检测和基因组分析;胞外核酸电转化后筛选特定抗性转化子进行MIC检测和质粒提取。结果:海河水中胞内共检出VAN-A、IMP、MCR-1、NDM-1和OXA-48五种SARGs,胞外共检出VAN-A、IMP、MEC-A和OXA-48四种SARGs。无论胞内胞外,胞内超级耐药基因（intracellular super antibiotic resistance genes,iSARGs）绝对浓度和胞外超级耐药基因（extracellular super antibiotic resistance genes,eSARGs）浓度均以9月最高（P＜0.05）。无论胞内胞外,iSARGs绝对浓度和eSARGs浓度均以下游D点最高（P＜0.05）。发现总磷的浓度会影响eSARGs浓度;海河水中菌群和基因变化受温度及地点影响;海河水中确实存在SARB的污染,分离出耐碳青霉烯类肠杆菌,耐碳青霉烯类大肠杆菌和耐多粘菌素肠杆菌,分离菌株受地点和时间的影响。MIC值检测结果显示耐药率均为100%,基因组分析发现存在多种SARGs及变形体,SARGs与耐药性相符合;海河胞外转化子MIC检测结果说明分离的转化子存在碳青霉烯类和多粘菌素类抗性,且存在耐药性质粒。结论:1.海河水中存在SARGs污染,iSARGs绝对总浓度和eSARGs总浓度受时间和空间因素的影响,同时发现总磷会影响eSARGs总浓度。2.温度及空间因素会影响水中菌群和基因的变化。3.海河存在SARB的污染,基因组分析得出预测耐药基因与抗药性符合。4.胞外转化子对碳青霉烯类和多粘菌素类抗生素耐药。
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