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背景:本论文系统研究了转录因子Snail在胰腺癌细胞中对HID1基因的转录调控以及HID1基因对肿瘤细胞迁移的抑制作用。胰腺癌是目前最致命的实体恶性肿瘤之一,具有侵袭性,诊断迟,抵抗放化疗等特点。最近研究表明Snail在肿瘤转移和发展过程中具有重要作用。Snail属于锌指转录因子,其羧基端的DNA结合区能够与靶基因的E-box(CANNTG)序列相结合,从而抑制其转录。Snail氨基末端的SNAG调节区能够招募多种辅阻遏物抑制其靶基因的表达并诱导上皮-间质细胞转化(EMT)。在EMT过程中,Snail主要通过下调上皮细胞标志物,例如上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)以及上调间质细胞标志物,例如神经性钙黏蛋白(N-cadherin)、纤维粘连蛋白(fibronectin)、波形蛋白(vimentin)等来促进细胞转移。HID1基因是在胰腺癌组织中用组蛋白H2AK119Ub1的抗体做Ch IP-seq实验检测到的。HID1首先在线虫的高温诱导休眠突变体中被发现,其功能涉及神经肽分选及囊泡的成熟和运输。另外有文献报道HID1在多种肿瘤细胞中低表达,但其对细胞迁移的影响却未见报道。而软件预测HID1的启动子中含有E-box序列,因此我们推测HID1可能是Snail的一个靶基因。方法:为了研究Snail是否调控HID1,我们在多种肿瘤细胞中构建了Snail过表达及敲低的稳转细胞株,并用实时荧光定量PCR技术检测Snail对HID1mRNA表达的影响。同时我们也检测了调控组蛋白H2AK119泛素化的Ring1A及EZH2敲低后对HID1表达的影响。为了进一步验证Snail对HID1的调控作用,我们构建了HID1启动子的荧光素酶报告基因质粒和其E-box序列突变质粒。在HEK293T细胞中,共转染Snail与荧光素酶报告基因质粒,并检测Snail对HID1启动子活性的影响。为了证实Snail是否与HID1启动子上的两个E-box直接结合,我们进行了染色质免疫共沉淀实验。接下来,我们进行了HID1的功能研究。我们首先在胰腺导管癌细胞PANC-1中构建了HID1过表达和敲低的稳转细胞系,并在胰腺导管癌细胞PATU8988中构建了共同过表达HID1和Snail的稳转细胞系。蛋白质免疫共沉淀实验检测EMT标志物的表达变化,transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果:在多种肿瘤细胞中,过表达Snail能够显著抑制HID1基因的转录,敲低Snail能够显著增强HID1的转录。此外,调控组蛋白H2AK119Ub1表达的多梳抑制家族蛋白Ring1A及EZH2的敲除都能够增强HID1的表达。荧光素酶报告基因实验显示Snail能够显著抑制HID1启动子的活性。染色质免疫共沉淀实验证明Snail能够直接与HID1启动子上的两个E-box直接结合,HID1是Snail的直接靶基因。在胰腺癌细胞中过表达HID1能够降低vimentin的表达,抑制细胞迁移;敲低HID1能够升高vimentin的表达,降低E-cadherin的表达,促进细胞迁移。在共同过表达Snail和HID1的PATU8988细胞中,发现过表达HID1能够阻断Snail诱导的vimentin的升高,但却无法完全阻断Snail对细胞迁移的促进作用。最后在19对胰腺癌和癌旁组织中发现HID1在胰腺癌组织中显著性低表达。结论:我们的结果表明HID1是Snail的一个直接靶基因并且HID1能够作为细胞转移的一个抑制因子。