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绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)是引起绵羊及山羊(尤其是羔羊)传染性胸膜肺炎的主要致病菌之一,它是一种无细胞壁的原核微生物,细胞大小在病毒与细菌之间。MO可引起机体的慢性感染,并伴随着其它病原微生物的协同感染。巨噬细胞作为机体免疫防御体系的重要成员,在固有免疫及适应性免疫过程中都扮演着关键角色,其能够通过吞噬、自噬等形式对外来病原菌进行吞噬、水解、清除并呈递相应的抗原,激活机体的免疫反应以应对病原菌感染。通过开展MO对巨噬细胞吞噬和自噬功能影响的研究,有望对揭示MO引起宿主慢性感染及协同感染机制提供参考。本研究以绵羊原代肺泡巨噬细胞及小鼠巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,建立MO Y98感染模型,对感染后巨噬细胞的存活、吞噬作用以及自噬作用等进行研究,获得了如下实验结果:(1)DiO荧光染色观察可知:绵羊原代肺泡巨噬细胞及RAW264.7细胞能够吞噬MO Y98。(2)MOY98感染绵羊原代肺泡巨噬细胞6h、12h,促凋亡相关基因BID、BAD随感染时间的延长表达下调,而抑凋亡相关因子BCL-2的表达上调;MOY98感染RAW264.7细胞24h时,促凋亡相关蛋白Bad、Bak、Caspase9的表达量显著下调。结果表明MOY98感染可抑制绵羊原代肺泡巨噬细胞及RAW264.7细胞凋亡。(3)利用蛋白质组学分析检测MOY98感染绵羊原代肺泡巨噬细胞24h时吞噬相关蛋白的表达变化,发现早期吞噬体相关蛋白表达上调,溶酶体及吞噬溶酶体蛋白表达下调;MO Y98感染可显著上调RAW264.7细胞早期吞噬体相关蛋白Eea1的表达,但晚期吞噬体相关蛋白Lamp1、Lamp 2及吞噬溶酶体相关蛋白Atp6vla的表达显著降低。结果提示MO Y98感染可以促进绵羊原代肺泡巨噬细胞及RAW264.7细胞早期吞噬体的成熟,但是会影响晚期吞噬体成熟和溶酶体功能。(4)MO Y98感染24 h时,能够增强RAW264.7细胞对大肠杆菌的摄取,但会抑制对胞内大肠杆菌的清除。(5)在MOY98感染绵羊原代肺泡巨噬细胞模型中,感染6h、12h时,自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达显著上调;感染延长至24h、36h时,自噬相关蛋白表达水平回落。在MOY98感染RAW264.7细胞模型中,感染24h时,自噬相关因子表达显著上调,而感染48h时,自噬相关因子表达显著下调。实验结果表明在MOY98感染早期能够激活巨噬细胞自噬,随着感染时间的延长自噬水平受到抑制。综上所述,本研究结果表明:巨噬细胞能够吞噬MOY98;MOY98感染能够增强巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬能力;MOY98感染可抑制巨噬细胞晚期吞噬体及吞噬溶酶体相关蛋白的表达,抑制巨噬细胞的清除功能;MOY98感染可抑制巨噬细胞凋亡;MOY98感染初期会激活巨噬细胞自噬,但持续的感染会抑制巨噬细胞自噬。本研究发现了 MO的免疫逃逸方式,初步揭示了 MO引起宿主长期慢性感染及协同感染的可能原因,为MO的致病机制研究提供了新的思路。