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目的 研究20％酒精浸润兔角膜上皮不同时间对角膜上皮细胞活性的影响，探讨20％酒精的最佳作用时间，为LASEK术中选择适宜的酒精浸润时间提供理论依据。 方法 健康新西兰大耳白兔22只(44眼)随机分为5组，即术后即刻处死组、术后3天处死组、术后7天处死组、术后10天处死组和正常对照组。其中术后即刻处死组8只，再按每2只1小组，随机分为4小组，分别行20％酒精浸润兔角膜上皮细胞20S、30S、40S、50S；术后3天、术后7天、术后10天处死组每组4只，再按每2只1小组，随机分为2小组，分别行20％酒精浸润兔角膜上皮细胞30S、50S：另设正常对照组2只。分别于术后不同时间将实验兔处死取材，角膜标本分别行锥蓝染色观察角膜上皮细胞的活性、光镜和扫描电镜观察角膜上皮细胞的组织结构及超微结构、酶组织化学染色[乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)]通过VIDAS图象分析系统测定角膜上皮细胞的酶活性，并与正常角膜上皮细胞进行对比。 结果 (1)术后即刻处死组锥蓝染色观察发现，20％酒精浸润兔角膜上皮细胞20S、30S，上皮细胞在位无着色，活性无明显降低；20％酒精浸润40S，部分角膜上皮细胞坏死脱落，在位细胞部分淡染，细胞活性明显降低是；20％酒精浸润50S，角膜上皮细胞大片坏死脱落，在位细胞大部分被染色，细胞活性基本丧失。(2)光镜下，术后即刻处死组20％酒精浸润20S、30S，表层上皮连续，细胞无脱落，基底细胞体积增大，排列整齐，核浆比下降；20％酒精浸润40S、50S，表层上皮断裂不连续，在位细胞较少，基底细胞水肿，细胞间距增大，排列不整齐，核浆比下降。术后3天处死组，表层上皮基本恢复正常，各层细胞排列整齐，组织学形态基本恢复正常。(3)扫描电镜下，术后即刻处死组20％酒精浸润20S、30S，兔角膜上皮细胞在位、无脱落，细胞表面微绒毛微皱襞减少，更新孔减少或关闭；20％酒精浸润40S，上皮细胞皱缩、卷起或脱落，细胞间有较大裂隙，在位细胞表面微绒毛微皱襞及更新孔消失；20％酒精浸润50S，上皮细胞活性完全丧失，细胞大部分脱落，在位细胞表面微绒毛微皱襞及更新孔消失。20％酒精浸润30S至术后3天，上皮细胞基本恢复活性，表面微绒毛微皱襞增多、更新孔增多并开放；20％酒精浸润50S至术后3天，表层上皮细胞完全覆盖，细胞间粘附不紧有裂隙，细胞表面出现少许微绒毛微皱襞，无更新孔开放，细胞活性较低。20％酒精浸润30S至术后7天，细胞活性完全恢复；20％酒精浸润50S至术后7天，细胞问裂隙基本消失，表面微绒毛微皱襞增多，更新孔第一章中文摘要开放，细胞活性基本恢复。至术后10天，细胞活性完全正常。(4)酶组织化学染色，角膜上皮细胞内LDH表现为蓝色反应颗粒，SDH表现为紫蓝色反应颗粒，分布于细胞质中。术后即刻处死组20%酒精浸润205、305，角膜上皮细胞酶活性与正常对照组无显著性差异(p>0.05);20%酒精浸润405、505，角膜上皮细胞酶活性与正常对照组有显著性差异(p<0.001)，20%酒精浸润305与浸润405比较，角膜上皮细胞酶活性的差异有显著性(p<0.001)，20%酒精浸润405与浸润505比较，角膜上皮细胞酶活性的差异无显著性(p>0.05)。20%酒精浸润305术后3天、术后7天、术后10天角膜上皮细胞酶活性与正常对照组无显著性差异(p>0.05);20%酒精浸润505至术后3天，角膜上皮细胞酶活性与正常对照组有显著性差异(p<0.05)，至术后7天、术后10天，角膜上皮细胞酶活性与正常对照组无显著性差异(p>0.05)。 结论(1)20%酒精浸润兔角膜上皮205、305，角膜上皮细胞的活性无明显降低:(2)20%酒精浸润兔角膜上皮405以上，角膜上皮细胞的活性明显降低，而且术后角膜上皮的愈合明显延缓;(3)为临床上LASEK手术中选择适宜的酒精浸润时间提供理论依据。