论文部分内容阅读
胃癌(Gastric carcinoma)是一种较为常见的恶性消化系统肿瘤,严重影响着人类的健康,发病率为10-150/10万,全球新增病例约93.4万人／年,位列所有恶性肿瘤第2位,在所有肿瘤导致的死亡中死亡率位列第4位[1],与其他癌症相似,手术治疗、放射治疗以及化疗是胃癌常用的治疗方法,其中放射治疗为手术前后首选的治疗手段[2]。然而由于放射线常见的副作用是对正常组织的损伤及肿瘤对放射线有一定的抵抗,因此放射治疗的效果常受到一定的影响,所以在临床上常选用放射增敏剂来增强放射线对肿瘤细胞的杀伤作用。因此,高效低毒的放射增敏剂的研发已成为胃癌治疗的必经途径。吴茱萸碱(evodiamine, EVO)是一种纯天然化学成分,提取于芸香科植物吴茱萸接近成熟的果实中,主要药理作用有抗炎、抗血小板凝集、镇痛、体温调节等[3]。近年来众多体内外研究表明EVO对宫颈癌[4]、肺癌、结肠癌[5]、甲状腺癌[6]等多种肿瘤具有抑制生长的作用。本课题组的前期实验证实EVO可增强舌鳞状细胞癌Tca8113细胞对放射线的敏感性7],为了进一步研究EVO对其他肿瘤细胞是否也可影响其放射敏感性,拓展其应用空间,本研究选用胃癌SGC7901和BGC823细胞,探讨EVO联合放射线对胃癌SGC7901和BGC823细胞放射敏感性的影响,并初步探讨其可能的发生机制,以期提供胃癌治疗中选择放射增敏剂的基础研究资料。本研究主要分为两个部分：实验分组：(1)对照组(C)；(2)单纯吴茱萸碱作用组(EVO)；(3)单纯放射线作用组(Radiation)；(4)联合作用组(R+E)；其中联合作用组(R+E)又分为照射前24h加药组(A)、照射后立即加药组(B)。1.EVO对胃癌SGC7901和BGC823细胞增殖的抑制作用及对放射敏感性的影响MTT实验检测EVO对胃癌SGC7901和BGC823细胞增殖的影响,结果显示EVO对胃癌SGC7901和BGC823细胞的抑制率随着药物作用时间及药物作用浓度的增加而增大；克隆形成实验中EVO联合不同剂量的放射线均不同程度地影响胃癌SGC7901和BGC823细胞克隆形成能力,并且A组处理后细胞的克隆形成能力要弱于B组,也就是说联合作用组中先加药组(A组)对克隆形成能力的影响作用优于后加药做(B组),用单击多靶模型拟合细胞生存曲线,得出联合作用组的放射生物学敏感参数Do为SGC7901(A4.5；B4.0),BGC823(A4.3；B3.9)放射增敏比SGC7901分别为(A1.21.21.41.5；B1.11.21.41.5)BGC823分别为(A1.01.21.41.5；B1.01.21.41.4).2.EVO对胃癌SGC7901和BGC823细胞放射敏感性影响的机制初探采用流式PI单染比较不同放射剂量组及EVO联合不同放射剂量组对细胞周期分布的影响,EVO联合不同剂量放射线(2,4,6,8Gy)使细胞停滞在G2/M期的比率SGC7901分别为(A42.1%42.1%55.4%69.3%；B36.2%48.4%51-3%64.2%)BGC823分别为(A31.3%36.4%37.1%44.1%；B24.1%30.2%36.3%37.1%)均显著高于单纯放射组SGC7901(32.1%32.1%34.3%36.1%)BGC823(14.2%20.4%26.3%32.1%)伊<0.05),且同种细胞中现加药组较后加药组对细胞G2/M期的阻滞效果更加明显；Western blot检测caspase3蛋白表达的变化,结果表明不同照射剂量下EVO联合放射组相对于单纯放射组其caspase3的表达量均有所提高。结论EVO可增强胃癌SGC7901和BGC823细胞对放射线的敏感性,并且联合作用组中先加药组较后加药组增强放射敏感性的作用更明显,其可能的机制为放射线联合EVO使细胞周期停滞在对射线较为敏感的G2/M期,且激活caspase3凋亡基因而促使细胞凋亡。