论文部分内容阅读
高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)是一种优质的草坪草,利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。我们在建立并研究了高效的高羊茅组培再生体系的基础之上,通过基因枪法转化来自拟南芥的 AtNHX1、CBF3 和 CBF4 基因,获得转基因株系,以期为生物技术培育抗旱、抗寒、耐盐草坪型高羊茅奠定基础。主要研究结果如下: 1.对高羊茅再生体系的研究与建立。利用幼苗下胚轴建立了高羊茅植株再生体系,当高羊茅种子以次氯酸钠为主要消毒剂时,其最适的浓度和时间分别为次氯酸钠50%(V/V)处理 20 min,种子发芽率为 80%,污染率为 0%。同时发现用高羊茅下胚轴诱导愈伤组织时,下胚轴的不同的切法对愈伤组织诱导有影响,从一端切的诱导愈伤率为 74.7%,比从两端切(55.8%)高出 18.9%。以下胚轴为外植体,2,4-D 的浓度为 9 mg·L-1时,愈伤组织诱导率最高,高羊茅愈伤组织的分化再生率可达 80.7%。 2. 利用基因枪法转化来自拟南芥的 AtNHX1 基因,PCR 检测再生植株 80 株,其中29 株为阳性。随机抽取 PCR 检测阳性植株 Western-blotting 检测也为阳性。同时,对转基因植株进行了草丁膦涂抹实验发现,转基因植株对除草剂的耐性也提高。 3. 拟南芥 CBF4 基因为干旱专一诱导的转录因子 CBF 家族成员,用诱导型启动子RD29A 驱动,含有草丁膦抗性选择标记的 pGreen0229-RD29A-CBF4-DHA 植物表达载体,利用基因枪法轰击高羊茅的胚性愈伤组织,得到 24 株 PCR 检测为阳性的转基因植株。 4. 分别用诱导型启动子 RD29A 和组成型启动子 CaMV35S 驱动,将 CBF3 基因插入到质粒载体 pGreen0229 中,得到含有草丁膦抗性选择标记的植物表达载体pGreen0229-35S-CBF3-DHA 和 pGreen0229-RD29A-CBF3-DHA。利用基因枪法转化高羊茅的胚性愈伤组织,分别都得到 22 株转基因植株,经 PCR 和 Western-blotting 检测表明,CBF3 基因已经整合到高羊茅基因组中。