流行病学资料表明，非甾体抗炎药(Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs，NSAIDs)可降低大肠癌的发病率，动物实验中NSAIDs可抑制结肠肿瘤的形成，使发生数量减少，肿瘤体积缩小，表现为剂量依赖性。NSAIDs的这种对肿瘤的防治作用的机理不是完全清楚，但大量研究表明与抑制靶分子环氧合酶-2(cyclooxygenease-2，COX-2)的活性有关。目前已知COX有两种同功酶形式：环氧合酶-1(COX-1)和环氧合酶-2(COX-2)。COX-1是组成性酶，该酶及编码它的信使核糖核酸广泛分布于各种组织，正常情况下保持着稳定的水平，各组织产生的前列腺素也保持相对恒定的浓度，以保证细胞的正常活动，包括保护胃粘膜、调节血管张力、调节肾功能等；COX-2是诱导性酶，正常情况下机体组织内分布很少，其基因可因生长因子、细胞因子、细菌毒素、致炎物质等刺激而迅速表达，从而COX-2蛋白表达量也迅速升高，与炎症、肿瘤发生等病理过程有关。近年来COX-2表达与肿瘤的关系日益受到重视，研究发现在许多肿瘤中(结、直肠腺瘤及腺癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、骨肉瘤)COX-2mRNA及蛋白质水平较正常组织升高，COX-2通过抑制凋亡、促进肿瘤血管的发生、促进肿瘤转移等机制促进肿瘤的发生发展。NSAIDs对COX-1的抑制与其不良反应相关，而对COX-2的抑制才是其发挥药理作用的主要作用机理。传统的NSAIDs对COX抑制无选择性，消化道粘膜糜烂、溃疡、出血、肝、肾功能障碍等副作用发生率高，限制了其在临床上的应用。COX-1与COX-2在 — ———￥——￡＆—— 体内分布不同，所组成的氨基酸序列虽有61％的相同，但其酶的活性部位结 构不同，COX－l的活性部位有谷氨酸和组氨酸，COX－2的相应部位为频氨 酸和精氨酸l”，引］。这就为找到选择性作用于 COX上而不抑制 COXl的药物 奠定了理论基础，开发既具有药理作用又对其他组织的毒性较低的新的 NSAIDs。近年来，人们致力于开发选择性抑制COX－2的NSAIDs，如尼美 舒禾（nimesulide）、塞雷西布（celecoxib，SC－58635）、美洛昔康则eloxicam）、 ROfeCOX山（MOXX，MK心966厂 这些药物对于结肠癌、类风湿性关节炎 （rhAuma宜＊d阶hfos，RA）、骨性关节炎（osteoartkms，OA）的疗效龟安全性、耐 受性的体内、外实验研究陆续有报道［兀，叩，m＼ 认为选择性抑制 COX《的 NS讪S治疗结肠癌［川1、OR及AR疗效与传统的NS皿S类似，副作用与 安慰剂接近。基于以上理论，本研究检测了SGC7901及SGC7901转染COX上 反义核酸的7901人S细胞的COX上蛋白表达水平、肿瘤细胞的生长特性、 细胞周期、凋亡及致瘤性，并检测NSAll3S对不同COX－2蛋白表达水平的 胃癌细胞系的生长及增殖活性的影响，观察裸鼠摄入NSAll3S后对移植瘤的 抑瘤作用及胃肠道溃疡、出血发生率，检测肝、肾功能，探讨NSA．－－－－S抑瘤 作用与COX－2蛋白表达水平之间的关系，探讨NSAfDs抑瘤作用机理，比 较传统的NSAIDS与选择性抑制COX－2的NSAIDS抑制肿瘤效应及胃肠道、 肝、肾的安全性，筛选治疗肿瘤有效而安全的NSAIDS，为进一步应用于临 床提供理论依据。 主要实验方祛及结果： l、免疫细胞化学染色：提示在蛋白质水平SGC7901有COX．2阳性表 达，转染质粒载体pCDNA3刁的790P细胞COX上表达与SGC7901 接近，SGC7901转染COX－2反义核酸的7901叭S细胞COX－2表达 量下调，呈弱阳性。 2、M TT j＄检测表明；COX－2低表达的7901．AS较之子SGC7901和 3Gas汀Oenterologvmst讪ie 第四军医大学西士学嵌枝艾 7901P细胞增殖活性降低。MTT法检测NSA．－－－－s药物对四种胃癌细 胞系SGC刁、7901P、7901－AS、AGS增殖活性的影响显示：塞 来西布对四种细胞系均有作用，是实验所选的七种药物中作用最强 的，但对COX—2表达下调的7901—AS的抑制作用略低于其他三 种细胞；尼美舒利作用次之，且对四种细胞系作用接近；吼跺美辛、 舒林酸、阿斯匹林呈现较明显的抑制作用，布洛芬、案普生无明显 的抑制作用。 3、流式细胞仪检测：细胞周期分析结果表明，通过转染COX—2反义 核酸下调COX一二蛋白表达可以逆转Q期延搁石期细胞由767％ 降至599％。叼垛美辛及塞来西布作用于SGC7901后亦可逆转G； 期延搁，GI期细胞由对照组的 743％降至 665％和 668％，此两种