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目的:通过前期的工作基础我们已经发现:精索静脉曲张大鼠睾丸及附睾组织中miR-210的表达显著高于正常大鼠,而在行精索静脉高位结扎术后,精索静脉曲张大鼠睾丸及附睾组织中miR-210的表达量显著降低,从而推测miR-210的高表达状态可能是精索静脉曲张致生精功能障碍的分子机制之一。在本课题中,我们通过观察miR-210在精索静脉曲张患者精浆中的表达,结合患者的临床资料及精液分析结果等数据,旨在评价精浆miR-210作为潜在的生物标志物在筛选生精功能障碍的精索静脉曲张患者中的价值;进一步地,我们通过体外细胞实验探索了miR-210在精索静脉曲张致生精功能障碍中的作用机制。方法:本研究分为两部分:⑴评价精浆miR-210作为潜在的生物标志物在筛选生精功能障碍的精索静脉曲张患者中的价值;⑵探索miR-210在精索静脉曲张致生精功能障碍中的作用机制。⑴评价精浆miR-210作为潜在的生物标志物在筛选生精功能障碍的精索静脉曲张患者中的价值(1)仔细询问并记录患者的既往病史,对所有患者均行体格检查,记录患者的年龄、身高、体重、吸烟、饮酒、禁欲时间、婚育状况、患侧症状等资料。(2)收集符合相关纳入标准的精索静脉曲张患者及健康对照男性的精液标本。(3)利用精液分析技术和实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)技术分别检测精液标本的精液参数及miR-210的表达量,观察miR-210在精浆中表达的稳定性,miR-210的表达量与精索静脉曲张严重程度的关系、手术治疗前后的差异及与生精功能受损的关系。(4)采用Cox单因素及多因素分析和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,评价精浆miR-210筛选生精功能障碍的精索静脉曲张患者的能力。⑵探索miR-210在精索静脉曲张致生精功能障碍中的作用机制(1)利用q RT-PCR实验技术检测miR-210在小鼠精原细胞(GC-2)中的表达情况。(2)采用细胞转染技术,分别上调和下调GC-2细胞中的miR-210,并通过CCK8实验检测GC-2细胞在上调/下调后增值率的变化。(3)利用兔多克隆抗体检测GC-2细胞在上调/下调miR-210后相关蛋白的表达情况,观察上调组、下调组与对照组在表达量上可能存在显著差异的蛋白。(4)通过Western Blot实验,验证miR-210和Caspase-3在精索静脉曲张致生精功能障碍中的机制联系。结果:⑴评价精浆miR-210作为潜在的生物标志物在筛选生精功能障碍的精索静脉曲张患者中的价值(1)204例精索静脉曲张患者纳入本研究,平均年龄(27.4±6.0)岁,已婚患者129例,未婚75例;Ⅰ级精索静脉曲张27例(13.2%),Ⅱ级精索静脉曲张42例(20.6%),Ⅲ级精索静脉曲张135例(66.2%);165例(80.9%)患者为左侧发病,30例(14.7%)为右侧发病,9例(4.4%)为双侧发病。(2)精索静脉曲张组miR-210平均表达量是对照组的2.18倍(p<0.01);Ⅲ级精索静脉曲张组miR-210平均表达量分别是Ⅰ级和Ⅱ级精索静脉曲张组的1.14倍(p<0.01)和1.11倍(p<0.01);Ⅱ级精索静脉曲张组miR-210平均表达量高于Ⅰ级精索静脉曲张组(p=0.045)。(3)精液分析结果存在异常的患者组,miR-210平均表达量是精液分析结果正常患者组的1.10倍(p<0.01)。(4)与术前相比,术后3个月患者的miR-210相对表达量下降,平均值是术前的0.48(p<0.01)。(5)Cox单因素及多因素分析显示精浆miR-210的表达量与精索静脉曲张患者出现生精功能障碍独立相关:1.81(1.08-3.05),p=0.02。(6)ROC曲线显示,精浆miR-210对筛选生精功能障碍的精索静脉曲张患者具有显著的价值:AUC=0.94,p<0.01;敏感度=88%,特异度=90%。⑵探索miR-210在精索静脉曲张致生精功能障碍中的作用机制(1)miR-210上调组,GC-2细胞的数量在5组(对照组、miR-210上调组、miR-210上调阴性对照组、miR-210下调组和miR-210下调阴性对照组)中最高(p<0.05);而miR-210下调组,GC-2细胞的数量在5组中最低(p<0.05);另外3组间无显著差异(p>0.05)。(2)以上5组GC-2细胞中pro-caspase-3的表达并无显著差异(p>0.05);然而,miR-210上调组cleaved caspase-3的表达在5组中最高(p<0.01),而miR-210下调组cleaved caspase-3的表达却在5组中最低(p<0.01),另外3组间无显著差异(p>0.05)。结论:⑴精索静脉曲张患者精浆中miR-210的表达量显著高于健康男性,且其表达量与精索静脉曲张病情严重程度分级呈正相关;⑵生精功能障碍的精索静脉曲张患者精浆中miR-210的表达量显著高于生精功能正常的精索静脉曲张患者;⑶精浆miR-210可作为潜在的生物标志物用于筛选生精功能障碍的精索静脉曲张患者;⑷miR-210可通过促进caspase-3的活化,诱导生精细胞的凋亡,从而在精索静脉曲张致生精功能障碍中发挥作用。