论文部分内容阅读
目的:建立兔vx2肝脏转移瘤模型,使用DSA及CT、MRI等影像设备,通过对兔vx2肝脏转移瘤模型进行DSA及MRI、CT增强扫描,通过观察,分析肝脏转移瘤的影像学表现与病理学联系。
方法:
1.兔vx2肝脏转移瘤模型的建立
1.1 VX2细胞株制备将瘤细胞接种于兔后腿上段外侧肌肉内成瘤并传代。2周左右接种处可扪及一2cm×2cm实质性包块。由耳缘静脉注入空气处死兔子。严格无菌条件下剥离肿瘤,切取包块边缘生长旺盛的鱼肉样组织置于盛有生理盐水的平皿中,用眼科剪剔除豆腐渣样坏死组织和结缔组织。部分制成瘤细胞悬液待用。部分瘤组织放入冻存管内按要求冷冻存放,待日后应用。(冻存液的制法:三种试剂由二甲基亚砜、胎牛血清、培养基按照1:4:5比例)
1.2 VX2瘤细胞悬液的制备在超净台上,我们将鱼肉样癌组织用眼科剪尽量剪碎,在生理盐水内反复吹打,经200目滤网筛过滤制成瘤细胞悬液,离心(1000 r/min)5 min,台盼蓝染色计活细胞数,配成1×106个细胞/ml的VX2细胞悬液,待种植。
1.3兔肝VX2移植癌模型建立新西兰大白兔50只,雌雄不限体重为2.5-3.0kg由河北医科大学实验动物中心提供。动物术前禁食12 h,用1％戊巴比妥钠,3ml/kg耳缘静脉注射全麻,取仰卧位,固定四肢于兔手术台上,上腹部备皮,常规消毒铺巾,于剑突下2cm正中开腹约2-3cm长,暴露肝左叶下缘,用生理盐水蘸湿纱布塞到肝左叶下方,依靠纱布与肝的摩擦力拉出肝左叶,在较厚的区域用1ml注射器针头向肝门方向插入肝被摸下约0.5cm-1.0cm处回抽无回血时,再缓慢注入VX2细胞悬液0.3ml,注射完毕后快速拔针,在穿刺点处附上一小块无菌明胶海绵块压迫止血,一方面减少瘤细胞溢出使腹腔种植；另一方面尽量使肿瘤种植在肝叶深部,可使瘤灶靠近较大血管支易于获得血供。约半分钟拿开明胶海绵块看肝脏表面是否出血,确认无出血及瘤细胞溢出后还纳肝脏,逐层缝合。术后腹腔内注入青霉素40万u,分两层关腹,即腹膜与腹肌一层,皮肤与皮下组织一层。术后青霉素40万u静脉缓慢推注,1次/日,连续3 d。
2.影像学及病理学指标检测与分析
2.1 CT、MR检查CT采用美国GE公司LightSpeed QX/i多层螺旋CT机,行CT平扫和动脉期、门静脉期及延时期三期增强扫描。肝脏平扫,扫描参数:80kV,120 FOV14,层厚2.5mm,螺距0.969mm,Pitch1:1；增强扫描采用高压团注方式,延迟5s扫描,扫描24s。造影剂碘海醇1ml/kg,速度为1ml/s。MRI应用德国西门子1.5T机扫描,序列采用T1WI,in-phase,SPGR(spoiledgradient-echo sequence),翻转角80度。行MR平扫和动脉期、门静脉期及延时期三期增强扫描。
2.2据CT测量指标进行分组在种植后14天对肝VX2瘤灶行CT/MR平扫加增强扫描,每次扫描前动物禁食12 h,不禁水。全麻并固定在自制的检查板上,共选出30只兔子作为研究对象,采用数字表法完全随机分为三组:每组10只。分别进行CT、MRI、DSA检查。
2.3 DSA检查:经股动脉超选肝总动脉插管造影介入治疗选用的数字减影血管造影机为SIEMENS ANGIOSTARPlus。实验兔麻醉固定后,腹股沟区常规消毒铺巾。在右侧腹股沟区域股动脉搏动最强处沿股骨走形纵行切开皮肤,沿股动脉分离皮下组织,钝性分离肌肉组织,暴露股血管鞘,用刀尖划开股动脉鞘,分离出股动脉长约2 cm,远端用手术线结扎,近端穿手术缝线备用。提紧远端缝线,用5F自制血管套针穿刺入股动脉,抽出针芯,缓慢送入穿刺针鞘管约4-5cm,在鞘尾端迅速拧上3F动脉防漏套鞘,透视下随后跟入TERUMO PROGREAT微导管及导丝,导丝头端要长出导管头约2.0cm,使管头至胸12-腰1椎间隙水平,导管头偏向右前方上下滑动寻找腹腔干,若腹腔干不易找出,可行腹主动脉造影,腹腔干造影注射剂量为:对比剂应用碘的质量浓度为370g/L的优维显,延时注射1 s,采集速率3帧/秒。注射速率1ml/秒,注射剂量为6ml。1ml/s,总量为5ml,压力为300kpa。后超选择至肝固有动脉,行肝固有动脉造影注射剂量为4ml,注射速率0.8ml/秒,经造影证实肿瘤显影。术毕拔除导管及鞘管的同时结扎股动脉近端及远端,逐层缝合并包扎切口,介入术后预防感染方法同模型建立部分。
2.4观察指标记录观察对照组和实验组CT、MRI及DSA造影影像表现,统计归类。记录DSA瘤体体积、CT平扫与增强扫描(三期)瘤体大小、MR平扫与增强扫描(三期)瘤体大小,肿瘤的数目,并观察肿瘤周围移行带变化。与病理结果进行对照,记录CT、MR及DSA发现病灶的数目。
2.5病理检查动物死亡后立刻开腹完整切取肝脏标本,记录肿瘤体积大小和病理学表现。病理标本均同时包含癌组织和癌旁组织,实验组以病灶边缘残存肿瘤部分为中心取材。10％的福尔马林固定后石蜡包埋切片,切片厚度为4μm。行HE染色,观察瘤组织大体及镜下形态学,并与影像学表现进行对照。做病理大切片,低倍镜观察肿瘤结构。高倍镜观察肿瘤各个层次的结构,特别是瘤周强化的血管特征,观察血管的密度以及观察瘤周强化的血管特征。
VX2瘤解剖与病理表现:肉眼见肝内肿块呈苍白色,无包膜,与周围分界不清楚:突出肝外部分与腹腔种植肿块表面凹凸不平,呈菜花样。
结果:VX2移植瘤种植成功22只,病理结果显示成瘤29处。VX2移植瘤在CT及MRI上表现为占位性病变,呈类圆形或分叶状低密度或低信号结节,增强后发现富血供VX2移植瘤17处,表现为肿瘤中度强化或明显强化,肿瘤主体密度或信号明显高于肝实质。少血供肝移植瘤12处,肿瘤强化或轻微强化,肿瘤主体保持为低密度或低信号。富血供肿瘤明显多于少血供肿瘤(P<0.01)。以病理学检查做为金标准,CT、MR增强扫描、DSA发现病灶29处,CT平扫发现病灶23处,其中2处为假阳性,病理未发现肿瘤组织。MR平扫发现病灶28处,其中1处为假阳性。CT增强扫描、MR增强扫描、DSA的敏感性、特异性、准确性均为100％。肝VX2瘤影像表现:22只种植成功兔中发现病灶29个,其中16只1个病灶,5只2个病灶,1只3个病灶。病理示8只种植兔肝脏未发现病灶。种植后14天,CT及MR扫描组瘤体最大直径(x±s)分别为(2.5±0.7)cm、(2.4±0.5)cm。CT增强扫描显示肿瘤直径大于CT平扫(p<0.05),MR增强扫描显示肿瘤直径大于MR平扫(p<0.05),CT及MR增强扫描显示肿瘤直径与大体病理无显著性差异(p>0.05)。
1.CT表现:VX2瘤株种植两周后CT平扫时肿瘤多呈等或低密度区,增强扫描时动脉期表现为不均匀强化。门静脉期表现为瘤灶边缘环形强化范围扩大。延时期肿瘤周围易行带密度较门静脉期减低。
2.MRI:T1WI呈低信号;T2WI呈不均匀高信号。病灶边缘较清楚。有1例显示右侧及左下腹部多个大小不等肿块,最大约4cm×4cm,部分病灶与肝脏有明确分界。T1WI呈低信号,T2WI呈不均匀高信号,其内见大小不等片状相对低信号区,病理检查为钙化灶。
3.DSA表现:腹腔动脉造影时肝固有动脉显示清晰,门静脉显示清晰,肿瘤呈环形强化或片状影。肿瘤中心表现为缓慢下降的趋势,而正常肝实质则呈现持续缓慢上升的态势,在14s以后,肿瘤中心的密度小于正常肝实质的密度。而门静脉表现为先是缓慢上升的平台,然后在10s后表现为快速上升期。此时门静脉密度大于肿瘤中心区的密度。
4.CT扫描及DSA肝固有动脉造影显示瘤灶直径小于1.5cm的7处,瘤灶直径在2-3cm的15处,瘤灶直径大于4cm的7处。
结论:CT及MRI增强扫描是检测兔VX2肝脏转移瘤生长和血供的可靠方法,可以准确显示肿瘤周围移行带。DSA可以直接反映肿瘤血供情况。兔VX2肝移植瘤模型在主要表现为一种乏血供肝癌模型。