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目的:课题组前期的研究中发现,PHB1的另一个家族成员PHB2与Th17细胞关键的转录因子RORγt具有相互作用,也有研究报道PHB2与另一个重要的转录因子STAT3有相互作用,在Th17细胞中PHB1是否与STAT3有相互作用,并且这个相互作用是否能够调控Th17细胞的分化和功能?Th17细胞的分化和调控的研究可为治疗Th17细胞相关炎症以及自身免疫性疾病找到一个新的治疗靶点和治疗思路。方法:首先选用诱导分化各时间点的Th17细胞,通过荧光定量PCR检测PHB1与STAT3基因表达的变化趋势。接着通过基因重组技术分别构建HA-PHB1与Flag-STAT3表达质粒,共转入HEK293T细胞内,用免疫荧光方法观察PHB1与STAT3的定位。然后向HEK293T细胞内共转入HA-PHB1与Flag-STAT3表达质粒,用免疫共沉淀的方法来检测PHB1与STAT3的相互作用;再从人脐带血中分选出Na?ve CD4+T细胞,体外诱导分化Th17细胞,用免疫共沉淀的方法再次验证两者在TH17细胞中具有相互作用。最后构建PHB1干扰质粒,包装成慢病毒,在Th17细胞中削减PHB1基因的表达,Western Blot观察STAT3磷酸化的改变,ELISA方法检测在细胞上清中总的IL-17表达量,荧光定量PCR检测IL-17在转录水平上的变化。结果:在整个Th17诱导分化的进程中,PHB1与STAT3的基因表达具有一致性,并且在诱导分化的前期,也就是72小时内两者的一致性比较密切。PHB1与STAT3均可定位在细胞核以及胞质内,两者在胞质内的荧光强度比细胞核内更强。无论在HEK293T细胞内还是在人源性Th17细胞内PHB1与STAT3是存在相互作用,并且PHB1能与Ser727位点磷酸化的STAT3相互作用。在人源Th17细胞内削减PHB1会下调了Th17细胞IL-17A和IL-17F的分泌,另外还发现STAT3的表达也降低了。结论:PHB1与STAT3在Th17细胞存在相互作用,并且其相互作用能够影响Th17细胞的功能。