【摘 要】
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天山堇菜Viola tianshanica Maxim是堇菜科（Vio Laceae）堇菜属植物,广泛分布于我国新疆海拔3000米以上的山地草场之中。作为一种传统中药,该药材以全草入药,性凉,味微苦、辛,具有祛风清热、解毒消肿之功效,在临床上常用于发烧、热性感冒、咽痛、肢肿、小儿惊厥等疾病的治疗,是复方天山堇菜颗粒等抗炎抗病毒复方制剂中的主要组成成分之一。现代药理研究表明,天山堇菜提取物具有明显的
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区科技支撑计划项目“维药天山堇菜总黄酮有效部位抗流感候选药物研究”（项目编号:2016B03044-5）；
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天山堇菜Viola tianshanica Maxim是堇菜科（Vio Laceae）堇菜属植物,广泛分布于我国新疆海拔3000米以上的山地草场之中。作为一种传统中药,该药材以全草入药,性凉,味微苦、辛,具有祛风清热、解毒消肿之功效,在临床上常用于发烧、热性感冒、咽痛、肢肿、小儿惊厥等疾病的治疗,是复方天山堇菜颗粒等抗炎抗病毒复方制剂中的主要组成成分之一。现代药理研究表明,天山堇菜提取物具有明显的抗菌、抗氧化、抗炎等多种药理作用。黄酮、香豆素是其发挥药效的主要标识性成分。本课题的研究目标是优化天山堇菜总黄酮制备工艺以及探讨其抗菌抗炎活性,单因素结合正交优化天山堇菜总黄酮提取工艺,并用大孔树脂进行纯化;建立标识性成分秦皮乙素提取工艺,并在建立秦皮乙素大孔树脂纯化工艺的基础上,分析其吸附动力学和吸附热力学特性;通过体内外抗菌实验及二甲苯致小鼠耳肿胀和小鼠毛细管通透性实验考察了总黄酮的抗菌抗炎作用。主要研究结果简述如下。（1）优化的天山堇菜总黄酮提取工艺为:以70%乙醇为提取溶剂,料液比1:30,沸水浴提取3次,每次1.5h,总黄酮含量4.22%;富集纯化工艺为:上样液浓度1.0497 mg/m L,最大上柱量2.1 mg/g树脂,上样流速2.0 m L/min,6BV去离子水除杂,9BV 30%乙醇洗脱,洗脱流速为2.0 m L/min,总黄酮纯度为63.12%,三批放大实验结果表明优化的提取纯化工艺操作简单可行。（2）天山堇菜秦皮乙素提取工艺条件为:以95%乙醇为提取溶剂,料液比1:30,沸水浴条件下提取3次,每次提取1h,秦皮乙素含量0.90%;富集纯化工艺为:上样浓度2.5935 mg/m L,最大上柱量7.78 mg/g树脂,上样流速2.0 m L/min,除杂水量为7BV,7BV 50%乙醇洗脱,洗脱流速为2.0 m L/min。所得提取物,秦皮乙素纯度大于37%,回收率大于93%。吸附动力学和热力学研究结果显示,Freundlich模型可以解释HPD500对秦皮乙素的富集行为。吸附是一个自发（（35）G＜0）、放热（（35）H＜0）的过程,熵变（35）S小于0,表明吸附为熵减的过程。△G和△H的绝对值分别小于20 k J/mol和40k J/mol,属于物理吸附。大孔树脂对秦皮乙素的吸附行为符合拟二级动力学方程,R~2均高于0.99999。（3）天山堇菜总黄酮对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的抗菌作用。总黄酮对大肠杆菌的最小抑菌浓度MIC和最小杀菌浓度MBC分别为0.49 mg/m L和0.98 mg/m L;对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度MIC和最小杀菌浓度MBC分别为1.95 mg/m L和3.91 mg/m L,抑菌和杀菌效果均强于阳性对照复方一枝蒿颗粒。体内实验结果表明总黄酮在0.32 g/kg浓度下可显著降低两种菌感染小鼠的死亡率（P＜0.05）。天山堇菜总黄酮中、高剂量组（0.16、0.32g/kg）能抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,抑制率分别为22.3%（P＜0.05）和31.6%（P＜0.01）;并能显著抑制冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加,抑制率分别为27.7%和32.4%（P＜0.05）;两种模型均显示天山堇菜总黄酮具有明显的抗炎作用。
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