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慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B CHB)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus HBV)持续感染所致,可发展为肝炎后肝硬化和肝癌。目前我国人群中乙型肝炎表面抗原阳性率仍高达7.18%,每年有几十万人死于与乙肝相关的重症肝炎、肝硬化和肝癌,乙型肝炎病毒的慢性感染严重影响人民的身体健康。慢性乙型肝炎的发病机制十分复杂,HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte CTL)功能下降是导致HBV持续性感染的主要原因。辅助性T细胞(helper T cell Th细胞)根据分泌细胞因子的不同可分为Thl细胞和Th2细胞,Thl细胞通过介导细胞免疫,清除胞内病毒感染,Th2细胞通过辅助B细胞,促进体液免疫,Thl细胞对维持CTL功能起着重要作用。HBV感染后,如以Thl细胞占优势,则有利于促进HBV抗原特异性CTL增殖、活化,清除HBV感染；如以Th2细胞为主,CTL功能抑制不利于病毒清除。穿心莲内酯(Andrographolide)为爵床科植物穿心莲中提取的二萜内酯类化合物,是中药穿心莲的主要有效成分之一,穿心莲内酯具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用。研究表明,穿心莲内酯能诱导正常人外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ、IFN-α、TNF-α等,起到调节免疫作用,但对慢性乙型肝炎患者的免疫调节作用及是否对乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)具有抑制作用了解甚少,至今尚未见相关报道。本研究共有二部分内容。第一部分：分离CHB患者PBMC后给予穿心莲内酯刺激,采用实时荧光定量PCR方法检测CHB患者PBMC内IFN-γmRNA、IL-4mRNA、IL-10mRNA及TNF-αmRNA表达变化,了解穿心莲内酯对CHB患者免疫调节作用。第二部分：不同浓度穿心莲内酯刺激HepG2.2.15细胞后,采用实时荧光定量PCR方法检测细胞内HBV DNA复制水平,了解穿心莲内酯体外抗HBV的活性。目的探讨穿心莲内酯对体外培养慢性乙型肝炎患者PBMC表达Thl细胞因子IFN-γmRNA及Th2细胞因子IL-4 mRNA和IL-10 mRNA影响。方法采集健康人及慢性乙型肝炎患者静脉血后分离PBMC,细胞培养液调整细胞数至4×106／mL,接种于细胞培养板中,行细胞毒性试验、时间点试验及药物剂量试验。根据上述结果,实验组用穿心莲内酯10mg/L(0.1%二甲基亚砜稀释),对照组用0.1%二甲基亚砜加入细胞培养液中刺激慢性乙型肝炎患者PBMC,置细胞培养箱培养16小时后收取细胞。抽提RNA并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR法检测IFN-γmRNA、IL-4mRNA及IL-10 mRNA表达水平,比较慢性乙型肝炎与健康对照组的PBMC各细胞因子表达差异,比较实验组与对照组各细胞因子的表达水平是否有统计学差异。本研究统计学方法采用Wilcoxon秩和检验。结果慢性乙型肝炎患者PBMC的IL-4 mRNA表达水平高于健康人,而IFN-γmRNA、IL-10 mRNA的表达水平无明显差异。慢性乙型肝炎患者PBMC经穿心莲内酯10mg/L(实验组)及0.1%二甲基亚砜(对照组)处理16小时后,实验组PBMC的IFN-γmRNA表达水平高于对照组PBMC的IFN-γmRNA表达水平,有统计学差异(Z=-2.78,P=0.005),实验组PBMC的IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平明显低于对照组PBMC的IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平,有统计学差异(Z=-3.82,P<0.001)。PBMC表达IFN-γmRNA与IL-4 mRNA的比例(IFN-γmRNA/IL-4 mRNA),实验组较对照组明显提高,有统计学差异(Z=-3.82,P<0.001)。结论穿心莲内酯对体外培养慢性乙型肝炎患者的PBMC表达Thl细胞因子IFN-γmRNA及Th2细胞因子IL-4 mRNA和IL-10 mRNA均有调节作用,并能改善Th1/Th2平衡。目的通过检测经穿心莲内酯处理后HepG2.2.15细胞内HBV DNA复制水平,探讨其体外抗乙型肝炎病毒的活性。方法复苏HepG2.2.15细胞,用DMEM培养液培养,将细胞按每孔5×105／mL接种于12孔细胞培养板中。实验组分别予0mg/L、5mg／L、10mg/L穿心莲内酯共培养7天,对照组分别予Oumol/L、25umol/L、50umol/L阿德福韦共培养7天,每浓度2复孔,隔日换含相同浓度药物的DMEM培养液,培养结束后观察细胞形态。抽提HepG2.2.15细胞内病毒核心颗粒HBV DNA,采用实时荧光定量PCR方法检测实验组与对照组用不同浓度药物刺激后细胞内HBV DNA水平,比较同一组间不同浓度药物刺激后HBV DNA水平是否有差异。本研究统计学方法采用t检验,P<0.05有统计学意义。结果经0mg／L、5mg/L、10mg/L不同浓度的穿心莲内酯刺激后,HepG2.2.15细胞内病毒核心颗粒HBV DNA的复制水平均无明显差异(P>0.05)。而经Oumol/L、25umol/L、50umol/L阿德福韦刺激后,细胞内病毒颗粒HBV DNA复制水平有差异,且有统计学意义(P<0.05)。结论穿心莲内酯刺激HepG2.2.15细胞后,细胞内病毒核心颗粒HBV DNA的复制水平无明显变化,表明穿心莲内酯无直接抗乙型肝炎病毒的活性。