单纯疱疹病毒(Herpers simplex virus,HSV)是人类感染的常见病毒之一,根据血清型可分为Ⅰ和Ⅱ型两种。其中,Ⅰ型主要通过口面部感染,也存在性传播,Ⅱ型主要通过性传播,HSV在全球普遍流行。HSV病毒具有潜伏感染、反复发作、终身携带等特点,HSV病毒的这种特点与其免疫逃逸机制有关,HSV病毒通过躲避人体免疫系统的攻击实现潜伏感染和复发感染,因此HSV 一旦感染,很难被清除,患者受到长期疾病折磨。病毒糖蛋白(glycoproteins,gp)是病毒包膜上抗原表位,gD糖蛋白参与病毒与宿主细胞的吸附和融合,已被选作候选疫苗。近年研究发现,gC2是免疫逃逸相关的包膜糖蛋白,选取gC糖蛋白用于免疫机体,可阻断病毒的潜伏感染,有希望成为理想的候选疫苗。本研究以gC2、gD1、gD2重组包膜糖蛋白为研究对象,研究三种重组蛋白的免疫效果。通过对HSV-2 gC2蛋白抗原分析,优化筛选gC2蛋白胞外抗原富集区基因序列并化学合成,以pMCE5为载体,构建真核表达质粒pMCE5-gC2并转染至CHO细胞进行真核表达,亲和层析纯化gC2重组蛋白。以纯化的gC2重组蛋白、实验室保存的gD1和gD2重组蛋白为抗原,分别配伍弗氏佐剂和A1(OH)3佐剂,进行单独免疫和联合免疫,PBS作为对照组。分组如下:A1组(gC2+弗氏佐剂);A2 组(gC2+Al(OH)3);B1 组(gD1+弗氏佐剂);B2 组(gD1+Al(OH)3);C1 组(gD2+弗氏佐剂);C2 组(gD2+Al(OH)3);D1 组(gC2+gD1+gD2+弗氏佐剂);D2 组(gC2+gD1+gD2+A1(OH)3);E1 组(PBS+弗氏佐剂);E2 组(PBS+Al(OH)3)。三次免疫小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测效价,ELISPOT检测细胞免疫效果。实验结果表明,将构建的真核表达重组质粒pMCE5-gC2转染至CHO细胞内进行表达,纯化获得浓度为40μg/ml的gC2重组蛋白。以三种重组蛋白为抗原三次免疫,获取血清,并检测各组血清滴度。经检测,各组血清均为高滴度,其中Al(OH)3佐剂组产生的抗血清滴度均略高于弗氏佐剂组;弗氏佐剂组和A1(OH)3佐剂组的gC2重组蛋白产生的抗血清滴度要高于gD1、gD2蛋白;单独免疫组的抗血清效价均要高于联合免疫组。免疫后小鼠脾淋巴细胞,经相应的抗原刺激后,ELISPOT检测脾淋巴细胞刺激后分泌IFN-γ和IL-4的细胞频率,发现产生了较好的细胞免疫反应。实验表明在CHO细胞中表达纯化的gC2、gD1、gD2重组蛋白能够引起较好体液免疫和细胞免疫。在三种重组蛋白作为刺激源的作用下,IL-4的分泌水平要高于IFN-y,三种蛋白引起细胞免疫的水平为gD1>gD2>gC2。而弗氏佐剂组中单独免疫效果要优于联合免疫;A1(OH)3组中联合免疫效果要优于单独免疫。本研究通过以两种免疫方式、两种配伍佐剂,对gC2、gD1、gD2三种重组蛋白的免疫效果进行分析,为HSV亚单位疫苗及检测试剂的研制打下了良好的基础。