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肝癌是我国最常见、最具有危害性的恶性肿瘤之一。据WHO于2005年的统计,全世界每年新增肝癌患者62万,约59万人死于肝癌,在我国每年有20~30万人死于肝癌,严重威胁我国人民的生命健康,因而一直是我国研究的重点肿瘤之一。而肝癌早期一般无明显症状,一旦出现临床表现,病情大多已届入中晚期。近几十年来,肝癌总体预后并未得到显著改善,难以明确诊断而失去手术的时机是重要的原因之一。因此寻找理想的生物标记物,阐明疾病发生发展过程中起关键作用的蛋白质分子,以用于肝癌的辅助诊断一直是肝癌研究领域的热点和难点。蛋白组学的出现为寻找新的肿瘤标志物带来了新的机遇和挑战,也使寻找新的肿瘤标志物成为可能。本课题组的前期研究中,成功地运用SELDI-TOF-MS技术筛选肝癌患者血清中可能肝癌标记物,并在此基础上对标志蛋白分离、纯化,质谱鉴定。研究发现,相对为分子量7984Da的标志蛋白经质谱鉴定为嗜中性活性肽2(NAP-2(73)),该蛋白可能为肝癌的候选血清标志物。目的:为了验证SELDI筛选结果的可靠性,本研究通过制备NAP-2(73)多克隆抗体,研究嗜中性活性肽2(NAP-2(73))在肝癌细胞及组织中的表达水平。方法:采用DNAstart软件设计NAP-2(73)抗原表位,免疫新西兰家兔制备NAP-2(73)多克隆抗体。采用Western bolt及Real-time定量RT-PCR技术对NAP-2(73)在肝癌细胞株7721和正常肝细胞株7702中的表达水平进行了检测,并运用免疫细胞学的方法检测NAP-2(73)在肝癌细胞株7721和正常肝细胞株7702表达水平。在此基础上,从广西医科大学第一附属医院肝胆外科收集30例手术切除的肝癌及其癌旁组织,运用免疫组织化学的方法对NAP-2(73)在肝癌组织和癌旁组织中的表达进行了检测。结果:NAP-2(73 )多克隆抗体效价为1:729000。Western bolt和免疫细胞学的结果显示,在肝癌细胞株中NAP-2(73)呈阳性表达,而在正常肝细胞株中无表达。Real-time PCR结果显示肝癌细胞株中NAP-2(73) mRNA表达比正常肝细胞株增加了7倍。NAP-2(73)在肝癌组织中表达率为100%,其中63.33%呈强阳性表达,癌旁组织无强阳性表达;经统计学分析,两者NAP-2(73)的表达呈显著差异。结论:NAP-2(73)在肝癌细胞株的表达率为100%,而在人正常肝细胞株中无表达,且在肝癌组织和癌旁组织中的表达存在差异,验证了初筛结果的可信性和生物信息学的分析和推测,提示NAP-2(73)可能成是肝癌相关标志物。