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第一章 评价小鼠胸腺功能和状态准确方法的建立 目的:为了准确和全面地评价胸腺的功能和状态,需建立:实时定量PCR对初始T细胞标记物（sjTRECs）进行绝对定量以评价胸腺的生成和输出功能的研究方法;实时定量逆转录PCR对几种胸腺状念和功能相关基因的表达进行相对定量以直接评价胸腺微环境的研究方法。 方法: 实时定量PCR检测sjTRECs的方法:提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA;普通PCR扩增目的片段;纯化构建标准质粒的RAG2片段;构建标准重组质粒并鉴定;优化PCR体系;进行实时定量PCR反应,建立标准曲线;检测小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞sjTRECs含量。 实时定量RT-PCR法定量检测GAPDH、LMO2、Foxn1、IL-7基因表达的方法:提取小鼠胸腺淋巴细胞RNA;逆转录成为cDNA:PCR扩增目的片段;优化PCR体系;进行实时定量PCR反应,建立扩增曲线;反应结束后,改定阈值,软件输出Ct值;根据比较Ct值法公式,获得不同处理组间相关基因表达比值。 结果: 实时定量PCR检测sjTRECs的方法:确定最适反应条件和体系后实时定量PCR获得可信度高的标准曲线（斜率为-3.738,R2=0.998）和具产物单一峰的熔解曲线;通过标准曲线获得TREC和RAG的拷贝数;计算出样本的sjTRECs含量。 实时定量RT-PCR法定量检测基因表达的方法:普通RT-PCR扩增出目的片段;确定最适反应条件和体系后实时定量PCR获得S型的扩增曲线和具产物单一峰的熔解曲线;输出不同样本Ct值,根据比较Ct值法计算基因表达的比值。 结论:成功建立利用实时定量PCR检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量以及胸腺相关基因表达的方法。