川崎病PBMCs核因子-κB的活化及白细胞介素-8的研究

来源 :南昌大学医学院 南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bw133934
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目的 探讨小儿川崎病(KD)外周血单个核细胞(PBMCs)核因子-κB(NF-κB)的活化和相应炎症因子白细胞介素-8(IL-8)的表达及二者与KD发病之间的关系。 方法 (1) PBMCs的体外活化培养:采用密度梯度离心法无菌分离各受试对象PBMCs共40例(其中川崎病22例,正常对照者18例);用含10%胎牛血清的RPMI1640调细胞浓度为106/ml,接种于24孔培养板内,每孔1ml,编为3组,第一组为空白对照即自然培养,第二组加入终浓度为20nmol/L的12—肉豆蔻酰—13—乙酸佛波脂(PMA),第三组加入同样浓度PMA的同时加入终浓度为100μmol/L的NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂(PDTC),在37℃、5%CO2及相对湿度为95%的培养箱内培养1h;(2) 将培养1h的PBMCs涂片,4%多聚甲醛室温下固定30min,同时留取各组细胞培养上清液;(3) 免疫细胞化学方法检测各组PBMCs NF-κB的活化,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-8的含量。 结果 (1) PBMCs NF-κB的活化及IL-8的表达:①免疫细胞化学染色可见胞核和胞浆都有阳性着色,以胞核为主;②在自然培养情况下,对照(Control)组和KD组PBMCs均可出现一定量NF-κB活化,其培养上清液中亦有少量IL-8表达,KD组(15.19±4.99%、331.82±385.20pg/ml)显著高于Control组(4.71±2.70%、76.42±41.46pg/ml),差异有统计学意义(p=0.000);③加入PMA培养后,两组的PBMCs NF-κB活化细胞百分比均升高,同时细胞培养上清液中IL-8的表达量也明显升高,KD组(36.79±8.69%、946.17±669.62pg/ml)仍明显高于Control组(10.22±5.70%、149.58±101.99pg/ml)(p=0.000),与自然培养组(15.19±4.99%、331.82±385.20pg/ml)比较差异也有统计学意义(p=0.000);④给予NF-κB特异性抑制剂PDTC干预后,可见其对PMA刺激
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