论文部分内容阅读
研究背景和目的:
通过20多年的临床流行病学研究,我们发现长沙是世界脑卒中的高发地区,其发病率呈缓慢上升趋势。受国家“八五”“九五”攻关课题资助,我们既往的研究发现长沙汉族人群在血压、血脂、血糖水平、体重指数这些传统的常规脑卒中危险因素无明显差异的前提下,湖南长沙地区汉族人群脑卒中的发病率仍较其他人群的发病率高。这表明除了传统的脑卒中危险因素之外,尚有其他因素影响了脑卒中的发生发展。目前认为脑卒中属于多基因疾病,遗传因素在脑卒中的发生发展中有着重要的作用。但目前脑卒中发生的具体遗传学机制仍不十分明确。我们的前期研究表明,apoH,apoB等与脂质代谢相关的基因多态现象与长沙汉族人群脑卒中相关。本研究力图寻找一种能够对脑卒中发生发展有着多重作用的基因。
动脉粥样硬化是脑梗死和脑出血的一个共同病理过程,其形成和发展受到众多因素的影响。除了高血压、高脂血症、吸烟、饮酒等传统的脑卒中危险因素外,炎症细胞及其分泌的各种细胞因子与动脉粥样硬化的发生密切相关,如TNF、IL-6、IL-10等细胞因子和炎症介质均被证实参与了动脉粥样硬化的形成。
TGF-β1是一种多功能细胞因子;与动脉粥样硬化斑块形成、高血压发牛及血脂代谢紊乱等病理过程有关。研究表明 TGFB1-800G>A、-509C>T、+869T>C三个SNP参与了TGFB1表达的调节,可能影响到TGF-β1表达水平,且三者存在强连锁不平衡(LD,linkagedisequilibrium)。有研究证实TGF-β1 SNP与动脉粥样硬化形成、高血压发生有关。基于以上事实,我们推测TGFB1 SNPs亦与长沙汉族人群脑卒中可能相关。经文献检索,目前尚无有关TGFB1 SNPs及单体型分子标志与脑卒中的相关研究。
本研究旨在通过对长沙汉族人群TGFB1的多态分布规律的研究,从遗传流行病学的角度探讨TGFB1 SNPs与长沙汉族人群脑卒中的关系,揭示长沙汉族人群脑卒中高发病率的遗传学因素,并寻找可靠的脑卒中分子遗传标记;为筛选脑卒中的高危人群提供分子流行病学依据;同时也为脑卒中的基因功能学研究、治疗及预防奠定理论基础。
方法:
实验方法:应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)及DNA直接测序等方法对研究人群进行-800G>A、-509C>T及+869T>C基因分型。研究对象包括:①脑梗死(cerebralinfarction,CI)患者186例,其中有高血压病史患者(定义为CI+H组)和无高血压病史患者(定义为CI+WH组)分别为75例和111例;有糖尿病病史的脑梗死及无糖尿病病史的脑梗死患者分别为39例和147例;无颈动脉粥样硬化斑块患者(定义为CI+WAP组)为26例,有颈动脉斑块形成患者(定义为CI+AP组)为160例,其中软斑、硬斑及混合斑形成患者分别为68、33、59例;有脑梗死家族史的患者(定义为FCI组)为132例,无脑梗死家族史的患者(定义为NFCI组)为54例;②脑出血(intracerebral hemohage,CH)患者202例,其中有高血压病史患者(定义为CH+H组)和无高血压病史患者(定义为CH+WH组)分别为125例和77例;有糖尿病病史的脑出血及无糖尿病病史的脑出血患者分别为30例和172例;无颈动脉粥样硬化斑块患者(定义为CH+WAP组)为60例,有颈动脉斑块成患者(定义为CH+AP组)为142例,其中软斑、硬斑及混合斑形成患者分别为60、32、50例;有脑出血家族史的患者(定义为FCH)为104例,无脑出血家族史的患者(定义为NFCH)为98例。④160例正常对照人群。
统计学方法:应用SPSS13.0统计软件对所获得的实验数据进行相应的统计学处理:x2检验分析各组基因型的Hardy-Weinberg平衡吻合度;计量资料两两比较采用t检验,两组以上比较采用ANOVA方差分析;计数资料采用x2检验或Fisher确切概率法;建立logistic回归模型,将不同的脑卒中风险因素纳入模型,计量资料如血糖、血脂、年龄等进行分层分析,研究不同基因型对脑卒中发生风险的影响;利用SHEsis软件构建TGFB1单体型,并计算TGFB1-800G>A、-509C>T、+869T>C两两之间的D和r2值,分析三者之间连锁不平衡(linkage disequilibrium)程度及不同单体型与脑卒中的关系。
结果:
1.脑梗死(cerebral infarction,CI)组和脑出血(cerebral hemorrhage,CH)组分别与对照组比较,-800G>A基因型及等位基因频率分布无显著差异(P>0.05):FCI、NFCI组分别与对照组比较,-800G>A基因型及等位基因频率分布无显著差异(P>0.05);-800G>A基因型及等位基因在各组内H亚组和WH亚组之间分布差异无统计学意义(P>0.05);-800G>A基因型及等位基因在各组内AP亚组和WAP亚组之间分布无显著差异(P>0.05);各组内GG基因型携带者较A等位基因携带者TC水平低(P<0.01);对照组中GG基因型携带者LDL-C平均水平较A等位基因携带者低(P<0.01)。
2.CI组、CH组与对照组比较,-509C>T和+869T>C基因型及等位基因频率分布无统计学差异(P>0.05),FCI与对照组比较,-509T等位基因携带者及+869C等位基因携带者频率较高(P<0.05),其中-509T携带者脑梗死的患病风险为对照组的1.557倍,+869C携带者脑梗死的患病风险为对照组的1.45倍。-509C>T和+869T>C基因型及等位基因在各组内H亚组和WH亚组之间分布差异无统计学意义(P>0.05);-509C>T和+869T>C基因型及等位基因在各组内不同类型斑块亚组之间分布无显著差异(P>0.05);各组中不同类型-509C>T和+869T>C基因型携带者血浆TG、TC、HDL-C、LDL-C无显著差异(P>0.05)。
3.CI组、CH组与对照组中,-509C>T与+869T>C均存在强连锁不平衡关系,但与-800G>A连锁不平衡不明显(D=0.098,r2=0.000;D=0.019;r2=0.000)。-509C>T与+869T>C构成两种主要单体型-509C/+869T和-509T/+869C。CI组和CH组分别与对照组比较,单体型频率分布无显著差异(P>0.05)。
结论:1.TGFB1-509C>T及+869T>C与有脑梗死家族史的长沙汉族人群脑梗死发病可能相关,但与有脑出血家族史的长沙汉族人群脑出血发病无关,-509T和+869C等位基因可能是有脑梗死家族史的长沙汉族人群脑梗死发病的危险因子。
2.TGFB1-800G>A与血浆中TC水平可能相关,A等位基因可能是血浆TC水平增高的一个危险因素。
3.TGFB1-509C>T与+869T>C具有强的连锁关系,构成的单体型与长沙汉族人群脑梗死及脑出血发生无关。