炎性环境下热休克蛋白27在人牙龈成纤维细胞损伤愈合中的表达

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背景与目的:种植体周围炎是种植体失败的一个主要原因。种植体周围炎,即慢性进展性边缘炎症,被认为是一种炎症性反应,它导致种植体周围支撑骨组织的功能性吸收而致种植体失败。种植体周围炎病变部位主要表现为牙龈组织对种植体表面的附着能力较健康组织较低甚至无附着能力,局部IL-1β、LPS等炎症因子的水平较健康部位升高,且随着病变加重有升高的趋势。对于种植体周围炎的研究尚处在通过发现、检验种植体周围龈沟液中的炎症因子水平从而提供临床诊断指标的阶段,就其发生和发展过程中的细胞通路及关键蛋白研究尚无报道。本实验将观察热休克蛋白27(Heat Shock Protein 27, Hsp27)在白细胞介素-1β(IL-1)Ⅱ脂多糖(LPS)和香烟提取物(CSE)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤过程中的表达,重点在于观察Hsp27与人牙龈组织损伤愈合是否存在相关性,为后期研究并揭示Hsp27在种植体周围炎中的作用机制提供实验基础。方法:(1)人牙龈成纤维细胞原代培养;(2)免疫组化鉴别细胞来源;(3)MTT确定最佳IL-1β、LPS和CSE的刺激浓度和刺激时间;(4)通过单层细胞划痕愈合实验观察各种刺激物对牙龈成纤维细胞的迁移能力;(5)取第3代牙龈成纤维细胞接种于六孔板中,选用最佳浓度的IL-1β、 LPS和CSE,刺激人牙龈成纤维细胞细胞,提取细胞总蛋白,western bolting检测Hsp27的表达变化。结果:(1)免疫组化实验结果显示原代培养的细胞抗角蛋白抗体阴性表达,抗波形丝蛋白抗体阳性表达,胞浆呈棕黄染色,胞核蓝染。证明为中胚层组织来源而不是上皮来源,是人牙龈成纤维细胞的来源。(2) IL-1β, LPS和CSE干预后,随IL-1β,LPS和CSE刺激浓度的增高HGFs的迁移能力显著降低。(3)IL-1p干预后,HGFs中Hsp70,90表达量无明显变化,Hsp27表达量显著上调,并随IL-1p刺激浓度的增高而增高的趋势。(4)Hsp27在正常HGFs中呈弱阳性表达,LPS干预后的HGFs中Hsp27呈强阳性表达,且随刺激浓度的增高表达量有逐渐增高的趋势。(5)CSE干预后,Hsp27在HGFs中呈强阳性表达,且随刺激浓度的增高表达量有逐渐增高的趋势。结论:热休克蛋白在IL-1β、LPS、CSE诱导的HGFs损伤过程中的表达情况不同,其中Hsp27在IL-1β、LPS、CSE介导的HGFs炎症损伤中表达升高,且Hsp27表达量与HGFs体外愈合能力呈负相关关系;Hsp27在上皮炎症损伤愈合中可能起到关键性作用,但具体作用机制还有待进一步的研究。
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