人脂肪间充质干细胞来源的造血干细胞向CIK细胞的诱导分化研究

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目的:(1)改良体外分离培养人脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞的方法,比较两种来源间充质干细胞的成长特性;(2)探索多种细胞因子联合诱导下,脂肪间充质干细胞来源的造血干细胞(ADMSC-HSCs)能否分化为同时表达CD3+CD56+的淋巴系免疫细胞,即CIK细胞。方法:(1)采用改良酶消化法分离提取人脂肪和脐带标本中的间充质干细胞.通过贴壁培养纯化细胞,记录原代间充质细胞生长情况;使用倒置显微镜和吉姆萨染色观察原代和传代后两种细胞形态差别;通过MTT法绘制生长曲线比较两种细胞的增殖速率;使用流式细胞仪检测两种来源的间充质干细胞的特征表面分子。(2)取第三代脂肪间充质干细胞,利用经由细胞穿透肽转染shRNA(shRNA-337)并加入特定成分培养基诱导其定向分化,培养5天后,经流式细胞仪检测诱导细胞的造血干细胞特征性表面分子CD34、CD38、CD45表达情况。并收获脂肪间充质细胞来源的造血干细胞(ADMSC-HSCs)加入CIK诱导体系继续培养,培养7天、14天分别后检测CIK细胞表面标志分子CD3、CD56表达情况。结果:(1)经改良酶消化法均能成功获得的人脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞,脂肪充质干细胞的原代细胞增殖速度较快。两种间充质干细胞均呈典型的短梭形、漩涡样贴壁生长,脐带间充质干细胞体积较大。通过分析生长曲线,脐带间充质细胞的倍增速度略快于脂肪间充质干细胞。两种间充质干细胞均表达CD29、CD44、CD90、CD166间充干细胞特征表面分子,不表达CD34、CD45、CD49f、CD133。(2)脂肪间充质干细胞经细胞穿透肽转染shRNA-337后,诱导培养5天,细胞形态和分子表型均发生改变,ADMSC-HSCs呈集落样悬浮生长,产生CD34,CD38,CD45造血干细胞表面标志物;收获后的ADMSC-HSCs经CIK细胞诱导培养体系培养后14天出现CD3,CD56高阳性表达,CIK效应细胞CD3+CD56+细胞比率可达(25.12±1.38)%。结论:(1)改良酶消化法能成功分离脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞,脂肪间充质干细胞倍增速度略慢于脐带间充质细胞,但二者表达的干性表面标志一致。(2)脂肪间充质干细胞来源的的造血干细胞(hADMSC-HSCs)有诱导分化为CIK细胞的能力。
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