紫苏籽ACE抑制肽的分离纯化及结构功能研究

来源 :福州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liqi1987712
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紫苏可以做药用和香料用,其种子可以榨油,营养价值较高。现阶段国内外对于紫苏籽活性肽的研究主要集中于抗氧化、抗肿瘤、抗炎和抗过敏活性,以及制备紫苏籽蛋白呈味肽,而降压肽几乎没有报道。本研究以紫苏籽粕为原料,采用酶解法获得ACE抑制肽,并对其进行分离纯化和氨基酸序列鉴定,通过细胞试验研究其活性,并采用分子对接的方法初步研究其可能的作用机制。论文内容如下:酶解法制备紫苏籽ACE抑制肽的工艺优化及稳定性研究。碱提酸沉法得到紫苏籽蛋白,酶解法制备紫苏籽ACE抑制肽,以ACE抑制率为筛选指标,得到最适的水解酶为中性蛋白酶。单因素实验结合响应面优化,得到中性蛋白酶酶解紫苏籽蛋白制备ACE抑制肽的最佳条件为:加酶量7100 U/g、温度55℃、p H值6.5、底物浓度1%、酶解时间2 h,此时酶解产物(1 mg/m L)的ACE抑制率为88.55±3.3%。由稳定性实验发现,紫苏籽ACE抑制肽对酸、碱、热和部分金属离子都具有较好的稳定性,在模拟胃肠消化的实验中也表现出较好的稳定性。紫苏籽ACE抑制肽的分离纯化及序列鉴定。采用凝胶过滤色谱(Sephadex-G-25)结合反相高效液相色谱RP-HPLC对紫苏籽蛋白酶解产物进行分离纯化,采用LC-ESI-MS/MS对活性较高的组分进行氨基酸序列鉴定,并与数据库中的ACE抑制肽进行比对筛选,得到五个新型ACE抑制肽,其氨基酸序列及分子量分别为:LLRPPSH(818.96 Da)、VGAY(408.45 Da)、LLRNP(611.73 Da)、VLKPPSY(802.95 Da)、FRQL(562.66 Da)。体外ACE抑制活性验证结果显示,其IC50分别为3.731 mg/m L、0.861 mg/m L、1.231 mg/m L、1.194 mg/m L、1.730mg/m L。紫苏籽ACE抑制肽VGAY作用机制的初步研究。VGAY为ACE的竞争性抑制剂。细胞毒性实验显示,VGAY浓度1 mg/m L时,对HUVEC细胞没有显著毒性。浓度为0.05 mg/m L的VGAY能刺激HUVEC细胞显著提高NO的释放量。分子对接结果表明,VGAY通过氢键与ACE的部分活性位点结合,从而起到抑制ACE的作用。将四肽C端的酪氨酸(Tyr)突变为组氨酸(His)后,VGAH的ACE抑制活性显著下降,说明C端的酪氨酸残基(Tyr)对VGAY的ACE抑制活性起了很大的作用。另外,保留C端的Tyr,研究Trp对ACE抑制活性的影响,与VGAY相比,VGWY的ACE抑制活性提高约50%。
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