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目的:子宫颈癌为最常见的妇科恶性肿瘤之一,近年在发展中国家发病年龄有年轻化趋势。通过手术及放化疗的方法虽可改善早期宫颈癌预后,但对导致宫颈癌患者死亡的复发性、转移性宫颈癌,其疗效尚不理想。手术相对创伤较大而化疗药物长期大量应用可能导致毒性积累,副反应加重甚至化疗药物耐药,因此寻找高效、无毒的抗肿瘤药物成为研究热点。血管生成是促血管形成因子和抑制因子协调作用的复杂过程,在创伤修复、生长发育及生殖中占据重要位置。血管内皮细胞生长因子(VEGF)及环氧合酶2(COX-2)是与肿瘤血管生成密切相关的细胞因子,参与多种肿瘤的发生、发展。青蒿琥酯(ART)已证实对于肺癌、中枢神经系统肿瘤、结肠癌、白血病、黑色素瘤、肾脏肿瘤等肿瘤细胞具有良好疗效[1],且副作用小于传统化疗药物。目前体外研究证实,青蒿琥酯可通过抑制肿瘤组织血管生成,从而抑制肿瘤生长。本实验通过研究青蒿琥酯作用下宫颈癌U14移植瘤VEGF及COX-2的表达变化及其与微血管密度(MVD)的相关性,探究青蒿琥酯是否可通过抑制血管生成而发挥抗肿瘤效应。方法:1移植瘤动物模型的建立及实验分组收集对数生长期U14细胞,调整浓度为1×10~7/ml,接种于小鼠腹腔(0.7ml/只),待3-5天后腹水形成,取腹水离心后,生理盐水稀释为5×10~7/ml,于雌性KM小鼠(5-6周龄,15-17g)左后肢近背部皮下接种0.2ml。成瘤且肿瘤直径>5mm进行后续实验。将实验动物随机分为4组:1、正常对照组(未接种肿瘤,肌注生理盐水1/日)2、肿瘤对照组(成瘤后,肌注生理盐水1/日);3、ART组(成瘤后,肌注青蒿琥酯20mg/kg/d);4、DDP组(成瘤后,腹腔注射顺铂2mg/kg/d),各给药0.2ml。每组80只,各组共给药7日。后各组再次随机分为4组,分别于第10d、20d、30d、40d处死,每组20只。2肿瘤组织中VEGF及COX-2表达情况及MVD计数的分析制备肿瘤组织石蜡切片,免疫组化染色后进行图像分析,VEGF、COX-2表达强度以灰度值(GS)表示,数值大小与阳性细胞表达强度呈反比。以矩形走形计算200个细胞,计算各组阳性细胞表达百分率。光镜下VEGF染色阳性细胞呈棕黄色,采用weidner等方法进行MVD量化分析。首先在低倍视野下扫视整个组织切片,在肿瘤浸润区域选取内皮细胞染色分析、微血管数量密集的视野,随机选取6个高倍视野,对微血管数计算,计算平均值作为MVD。任何棕黄色阳性内皮细胞或内皮细胞簇,只要与临近肿瘤细胞、血管及其他结缔组织分界清楚,即可作为1个微血管数;肿瘤硬化取和大于8个红细胞的血管不做计数对象。3统计学处理:对各组数据通过SPSS13.0版本软件进行正态性、方差齐性检验,对VEGF、COX-2表达情况及MVD计数进行单因素方差分析(analysis of variance,ANOVA),对于不符合正态性或方差齐性检验者,采取K-independent samples秩和检验,SNK法进一步对多样本均数进行两两比较。结果:1小鼠移植瘤中微血管生成情况与肿瘤对照组移植瘤中MVD计数相比,DDP组及ART组均明显减低(均P<0.05)。肿瘤组织中MVD计数呈肿瘤对照组>ART组>DDP组的总体趋势。DDP组及ART组间无明显统计学差异(P<0.05),除在第20d时ART组肿瘤组织中MVD计数较DDP组明显增高(21.23±2.71v.s16.69±2.44,P<0.05)。在肿瘤对照组、DDP组及ART组中,各组MVD计数呈10d<20d<30d<40d的总体趋势,除肿瘤对照组在10d及20d中无显差异(20.59±2.52v.s22.72±2.97,P>0.05),ART组在20d及30d时无明显差异(21.23±2.71v.s20.30±5.06,P>0.05),其余各组间均差异显著(均P<0.05)。2 ART对小鼠移植瘤中VEGF和COX-2表达的影响2.1对小鼠移植瘤中VEGF表达情况的影响与肿瘤对照组第10天VEGF阳性细胞百分率为(20.58%±3.28%)相比,DDP组明显降低(14.89%±2.70%,P<0.05),ART组无明显变化(17.95%±2.02%,P>0.05)。第20d、30d及40d时,移植瘤中VEGF阳性细胞百分率呈肿瘤对照组>ART组>DDP组的总体趋势,除30d时,ART组与DDP组之间无明显差异外(38.54%±7.10%v.s31.67%±3.84%,P>0.05),其中各组之间均差异显著(均P<0.05)。ART组、DDP组及肿瘤对照组中VEGF阳性细胞百分率均呈10d<20d<30d<40d的总体趋势,除DDP组在第10d和20d时无明显差异外(14.89%±2.70%v.s17.41%±4.89%,P>0.05),其中各组之间均差异显著(均P<0.05)。在第10d及40d时,移植瘤中VEGF表达GS值在各组中无明显统计学差异(P>0.05)。第20d和30d时,与肿瘤对照组GS值(124.55±1.44,121.67±5.39)相比,ART组明显降低(118.14±5.33,111.24±6.42,P<0.05),DDP组在第20d时明显回升(132.98±3.49,P<0.05),第30d时GS值略有降低(120.40±3.89,P>0.05)。2.2对小鼠移植瘤中COX-2表达情况与肿瘤对照组第10天时COX-2阳性细胞百分率(34.10%±6.79%)相比,DDP组明显减低(16.92%±6.11%,P<0.05),ART组无明显变化(30.06%±5.28%,P>0.05)。在第20d、30d及40d时,移植瘤中COX-2阳性细胞百分率呈肿瘤对照组>ART组>DDP组的总体趋势,除30d时,ART组与DDP组之间无明显差异外(53.83%±5.54%v.s45.76%±11.83%,P>0.05),其余各组之间均差异显著(均P<0.05)。ART组、DDP组及肿瘤对照组中COX-2阳性细胞百分率均呈10d<20d<30d<40d的总体趋势。除ART组在第10d、20d时(30.06%±5.28%v.s31.88%±6.72%,P>0.05),及DDP组在第10d、20d时(16.92%±6.11%v.s19.32%±6.03%,P>0.05)无明显差异外,各组间均差异显著(均P<0.05)。与肿瘤对照组第10d时COX-2表达GS值(109.36±5.37)相比,DDP组明显回升(118.67±3.82,P<0.05),ART组无明显变化(109.52±6.40,P>0.05)。在第20d、30d及40d时,移植瘤中COX-2阳性细胞表达强度在ART组、DDP组及肿瘤对照组中无明显统计学差异(均P>0.05)。3小鼠移植瘤中VEGF、COX-2表达及MVD相关性分析小鼠肿瘤组织中VEGF及COX-2阳性细胞百分率在不同时间均呈正相关(10d:r=0.526,P<0.05;20d:r=0.599,P<0.05;30d:r=0.859,P<0.05;40d:r=0.951,P<0.05)。VEGF阳性细胞百分率与MVD计数之间在不同时间均呈正相关(10d:r=0.773,P<0.05;20d:r=0.558,P<0.05;30d:r=0.804,P<0.05;40d:r=0.565,P<0.05)。COX-2阳性细胞百分率与MVD计数之间在除10d时均呈正相关(10d:r=0.339,P>0.05;20d:r=0.615,P<0.05;30d:r=0.595,P<0.05;40d:r=0.563,P<0.05)。结论:1青蒿琥酯抑制小鼠U14移植瘤生长可能与抑制肿瘤组织中VEGF及COX-2的表达有关。2青蒿琥酯可显著阻抑小鼠U14移植瘤中微血管生成,抑制肿瘤组织生长。3 VEGF与COX-2在肿瘤组织中表达具有正相关关系。COX-2及VEGF与肿瘤组织中微血管生成具有相关性。